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1. (2024高三下·威宁月考) 科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达，请回答：
1. （1）该研究除了证明质粒可以作为载体外，还证明了（答出一点即可）。
3. （2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的转化方法导入大肠杆菌细胞，而体外重组的噬菌体DNA通常需与组装成完整的噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、胚胎干细胞、根尖分生区细胞、酵母菌中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是。
5. （3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞里表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验室中应选用缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加的抑制剂。
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1. (2024高三上·湖南期末) 为了获得抗蚜虫转基因棉花植株，研究人员分别从雪花莲和尾穗苋两种植物中提取了凝集素基因GNA和ACA，经PCR扩增(如图甲所示)，连接成GNA-ACA融合基因，再与质粒(pBI121)构建成重组载体(如图乙所示)，再经一系列操作将融合基因导入棉花细胞。回答下列问题：
1. （1）甲图中，A过程调节至95℃，目的是通过高温破坏，使双链DNA解聚为单链；B过程中需要两种引物，引物是。配制PCR反应体系时需在冰上预冷，等程序设置完毕后再放入PCR仪中，预冷的目的是。
3. （2）分析图乙可知，使用限制酶和DNA连接酶处理GNA基因和ACA基因，可获得GNA-ACA融合基因。将GNA-ACA融合基因导入质粒时应选用限制酶，目的是。
5. （3）利用含重组载体的农杆菌感染棉花细胞的方法称为。为筛选出转基因细胞，可将感染农杆菌的棉花细胞接种在含的培养基上，选取能在培养基上生长的棉花细胞，经植物组织培养可获得抗蚜虫转基因棉花植株。
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1. (2024高二下·惠州月考) 发酵工程在农业、医疗、食品等多个行业都有广泛的应用。在下列情境中仅通过发酵工程就能完成的是（）

A . 利用野生的人参细胞生产人参皂苷 B . 利用野生型赤霉菌生产赤霉素 C . 利用骨髓瘤细胞生产单克隆抗体 D . 利大肠杆菌用生产牛凝乳酶

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1. (2024高三下·武汉开学考) 据下图分析，下列有关基因工程的说法不正确的是（）

A . 为防止目的基因与质粒任意结合而影响基因的表达，应用限制酶Ⅰ、Ⅱ同时切割二者 B . 限制酶、DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键 C . 与启动子结合的是RNA聚合酶 D . 能够检测到标记基因表达产物的受体细胞中，也一定会有目的基因的表达产物

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1. (2024高三下·茂名月考) 为构建肝特异性CD36 基因敲除小鼠模型，研究人员利用Cre-loxP 系统开展实验。该系统中的Cre可识别DNA 分子中特定的loxP序列，当DNA 分子上存在两个同向loxP序列时，Cre可将两个loxP序列之间的 DNA序列剪除，切口连接形成的环化产物被降解，从而达到敲除特定基因的目的(如图1)。图2中的 A 鼠成对的 CD36 基因两侧均分别引入一个同向 loxP 序列(基因型表示为L⁺L⁺ $\text{[math]}$ 野生型为 L^-L^-) $\text{[math]}$ B鼠中含一个外源导入的Cre编码序列(基因型表示为(C⁺C⁺ $\text{[math]}$ 野生型为C^-C^-) $\text{[math]}$ ， Alb表示肝脏组织特异性启动子。研究人员利用 A、B两类工具鼠作为亲本，选用合适的杂交策略，即可获得基于Cre-loxP系统的肝特异性CD36 基因敲除目标小鼠。
回答下列问题：
1. （1）图 2 中 A 鼠的基因型可表示为L⁺L⁺ C^-C^- 。目标小鼠的基因型表示为。A鼠与B鼠杂交获得的子一代的基因型及比例为。欲获得目标鼠，应继续进行的实验操作是。
3. （2）启动子的作用是。图1中 Cre能将双链DNA 在特定部位切割开，其作用类似于基因操作工具中的。研究人员取鼠尾细胞通过(法)鉴定子代1~8号小鼠的基因型，结果如图3(已知 A 鼠、B鼠的基因型检测结果分别与图3 中子代6号、1号小鼠相同)，代表目标小鼠的是号，判断依据是。
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1. (2024·江西模拟) 培育耐盐碱作物对保障粮食安全具有重要意义。研究人员将野生大豆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因GsSAMS转入水稻中，增强了水稻对盐碱的耐受性。下列叙述正确的是（　　）

A . GsSAMS基因的转入增加了水稻染色体的数量 B . GsSAMS基因转入水稻后最终定位于核糖体中 C . GsSAMS基因在水稻中使用与大豆不同的遗传密码 D . GsSAMS基因在水稻中成功表达了其编码的蛋白质

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1. (2024·安徽模拟) 萝卜是百姓喜爱的一种蔬菜，筛选优良性状，开展种质创新，对落实国家“种业振兴行动”计划，丰富“菜篮子工程”有重大应用价值。
1. （1）采用常规杂交育种，可培育出不同根形的品种。萝卜的根形由A、a和R、r两对等位基因控制，且独立遗传。现将两种稳定遗传的圆形萝卜进行杂交，F₁全为扁形；F₁自交，F₂有扁形、圆形和长形三种表型，比例为9：6：1。由题意可知，F₂中，长形萝卜的基因型为，扁形萝卜中杂合子比例为。
3. （2）利用返回式航天器搭载萝卜种子可使细胞产生基因突变。假设突变发生在某基因的内部，若编码区缺失一个核苷酸，则会引起编码的肽链改变；若突变是一个核苷酸的替换，但没有引起编码的蛋白质功能改变，其原因可能是（答出2点即可）。
5. （3）萝卜硫素具有抗炎、抗癌等生理功能，由黑芥子酶（Myr）水解前体物质形成。研究人员提取总RNA、逆转录形成cDNA，然后设计Myr基因特异引物，采用PCR方法扩增目的基因，经凝胶电泳后，发现有多条扩增带（其中也包含目的基因片段）。在不改变引物、PCR扩增体系和模板量的情况下、可采用的方法，特异扩增目的片段。研究人员对扩增出的DNA片段进行了序列测定，序列信息见下图，推测其最多可以编码个氨基酸的多肽（终止密码子为UAA/UAG/UGA）。在多肽合成过程中，tRNA“搬运”氨基酸到核糖体上，氨基酸结合部位在tRNA的端。
7. （4）研究人员希望采用Ti质粒上的T-DNA转移Myr基因，以便获得萝卜新品种。图中A、B、C、D、E为5种限制酶及其酶切位点，选用（填字母）进行酶切，以使插入T-DNA中的目的基因正确表达；将转入目的基因的体细胞培养形成，分化成植株，用于生产。
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1. (2024·高三上期末·潮州) 成纤维细胞生长因子21（FGF21）是一种调节机体代谢的分泌型蛋白，具有降低血糖、提高胰岛素敏感性等生理活性。但由于FGF21稳定性差，导致FGF21药效较差。科研人员以含有FGF21基因（F）的重组质粒pSUMO-FGF21（p-F）为模板，对F进行定点突变，构建含突变基因的突变质粒PSUMO-mmtFGF21（p-mF），从而实现对FGF21的改造，部分过程如图1所示。据图回答下列问题：
1. （1）研究发现、改变FGF21中的氨基酸序列，可提高FGF21的稳定性。这首先需要在数据库中检索FGF21的氨基酸序列和，据此设计突变位点并对蛋白质结构进行模拟验证。
3. （2）通过PCR技术可实现对FGF21基因（F）进行定点突变。
  ①将引物、p-F（DNA模版）、缓冲液、无菌水、4种脱氧核苷酸和等加入微量离心管中，构成PCR体系进行反应。
  ②用于定点突变的引物长度不能过短，否则会由于，导致定点突变失败。
  ③应选择图2中的哪对引物进行定点突变。
  A.1和4
  B.2和3
  C.1和3
  D.2和4
5. （3）在转化大肠杆菌时，用低温和溶液处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞，有利于突变质粒进入大肠杆菌中。培养一段时间后，取适量菌液涂布在含有平板上筛选出含p-mF的细胞（菌落）。
7. （4）已筛选出含mF的大肠杆菌繁殖的后代中出现不含有mF的菌体，为了解决这一问题，最佳的方案是。
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1. (2023高二下·遵义期末) 柑橘溃疡病是由地毯草黄单胞杆菌引起的、发生在柑橘的一种病害。利用基因工程将来自水稻的Xa27基因导入柑橘外植体细胞，再利用植物组织培养技术可培育无病毒植株。如图表示科研人员利用柑橘幼苗获得抗病转基因植株的过程，回答下列问题：
1. （1）获得转基因抗病柑橘的核心步骤是，该过程的操作工具包括。
3. （2）共培养时，Ti质粒的作用是。
5. （3）脱分化与再分化过程中所用培养基需要更换，其中（填激素名称）的浓度和比例都会影响植物细胞的发育方向。
7. （4）从个体生物学水平鉴定转基因柑橘植株时，发现有几株不具备抗病能力，某同学推测是由于目的基因未成功导入受体细胞，另一同学认为还有可能是因为。
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1. (2023高二下·合肥期末) 研究人员将大麦细胞的LTP1基因导入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌可产生LTP1蛋白，并酿出泡沫更加丰富的啤酒，下图为转基因啤酒酵母的生产过程。回答下列问题：
1. （1）已知DNA复制时子链的延伸方向是5'→3'，图1中A、B、C、D在不同情况下均可以作为引物，用PCR技术扩增LTP1基因时应该选用作为引物。
3. （2）是实施基因工程的核心。图2中的B为质粒，质粒和LTP1基因结合形成重组质粒C.重组质粒C在受体细胞中能够稳定存在并发挥作用，在LTP1基因的首端必须具有，尾端必须具有终止子，还必须含有标记基因和目的基因。
5. （3）为检测目的基因在受体细胞基因组中的整合情况，首先采用DNA分子杂交技术检测LTP1基因是否导入成功，需要从转基因啤酒酵母中提取DNA，用作探针与之杂交。
7. （4）为检测转基因啤酒酵母是否产生LTP1蛋白，除检测LTP1蛋白是否产生及含量外，还可观察转基因啤酒酵母所酿啤酒的进行判断，若能检测到LTP1蛋白，但效果差，可能的原因是；若经检测确定细胞中无LTP1蛋白，可采用PCR技术检测细胞中的RNA，如果能检测到mRNA，则可能是；如果检测后确定细胞中无LTP1蛋白的mRNA，但之前能检测到LTP1基因，则LTP1基因未能正常转录的原因可能是。
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