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1. (2023高三上·渭南月考) 基因工程技术也称为DNA重组技术，其实施必须具备的四个必要条件是（）

A . 目的基因、限制酶、运载体、受体细胞 B . 重组DNA、RNA聚合酶、内切酶、连接酶 C . 模板DNA、信使RNA、质粒受、体细胞 D . 工具酶、目的基因、运载体、受体细胞

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1. (2023高三上·泸州开学考) [生物——选修3：现代生物科技专题]胰岛素是治疗糖尿病的特效药，但天然胰岛素在人体内的寿命只有几个小时。重症患者每天需要注射多次药物，增加了痛苦。通过蛋白质工程改变蛋白质的空间结构，可得到长效胰岛素，还可以增强其稳定性。如图是通过蛋白质工程获得长效胰岛素的过程。请分析回答：
1. （1）构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，图中构建新蛋白质模型的主要依据是。
3. （2）通过人工合成DNA形成的新基因应与结合后，转移到中，才能准确表达。
5. （3）若要利用大肠杆菌生产上述长效胰岛素，需要用到的生物工程有和发酵工程。
7. （4）图解中从新的胰岛素模型到新的胰岛素基因的基本思路是。
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1. (2023高三上·百色月考) 人体中α-2a基因表达的干扰素（α-2a）具有抗癌和抗病毒的能力。科学家们采用基因工程技术将α-2a基因导入大肠杆菌进行干扰素生产。图甲、乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

请据图分析回答：
1. （1）利用PCR技术将α-2a基因扩增n代，共需对引物参与子代DNA分子的合成，该过程中需使用酶。在该酶的作用下，从引物的端延伸子链。
3. （2）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，最好选用限制酶切割处理质粒、外源 DNA以防止质粒和外源DNA发生自身环化；构建基因表达载体时，用酶催化目的基因与质粒间形成键。
5. （3）干扰素（α-2a）体外保存相当困难，如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可在-70℃的条件下保存半年。这一目的已经通过工程实现了，该工程的直接操作对象是。
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1. (2023高三上·云南开学考) 科研人员通过PCR技术获得白蛋白基因启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建基因表达载体，培育出在肝细胞中特异性表达 Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述错误的是（）

A . 常用受精卵作为目的基因的受体细胞，以培育转基因小鼠 B . 基因表达载体中的标记基因用来筛选含目的基因的受体细胞 C . 可通过PCR技术检测转基因小鼠是否转录出了目的mRNA D . 将发育到囊胚期或原肠胚期的胚胎移植给受体小鼠

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1. (2023高三上·云南开学考) W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某研究小组制备乳腺生物反应器来获得W，基本过程如图所示。下列叙述错误的是（）

A . 步骤①用限制酶切割后可能会产生黏性末端 B . 获得的精子需要在获能液中处理后再进行受精 C . 取早期胚胎的滋养层细胞做DNA分析以鉴定性别 D . 步骤④中代孕母体会对移植的胚胎产生免疫排斥反应

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1. (2023高二下·肥西期末) 研究人员利用AFPs抗冻基因和Ti质粒构建重组质粒，选择所需重组质粒转入番茄植株，培育抗冻番茄，主要操作过程如下图。抗冻番茄经低温诱导后可溶性蛋白均比对照明显增加，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到可溶性蛋白的C区和B区染色加深。已知三种限制酶的识别序列及酶切位点如下表所示。请回答下列问题：

限制酶	BamH I	Bgl Ⅱ	EcoR I
识别序列及酶切位点	—G↓GATCC	—A↓GATCT	—G↓AATTC—

（1）构建重组质粒时，应选择、（酶）分别切割质粒和含AFPs抗冻基因的外源DNA。
（2）培育转基因植物时，常选择Ti质粒作为目的基因载体的原因是。将导入了表达载体的农杆菌与取自番茄的细胞共同培养，通过农杆菌的作用就可使目的基因进入番茄细胞，为筛选成功导入抗冻基因的番茄细胞，需在培养基中添加。通过过程④获得完整的植株，依据的原理是。与常规的种子繁殖方法相比，利用该技术培育抗冻番茄植株的优点是。
（3）可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测经低温诱导后抗冻番茄植株中的可溶性蛋白，若，则表明AFPs基因已表达出相应的蛋白质；也可采用进行个体生物学水平的检测。

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1. (2023高二下·舟山期末) 火龙果在低温下幼嫩茎段会部分受到伤害，脂质转移蛋白（LTPs）被证实在植物抵抗低温胁迫中有重要作用，控制该蛋白合成的基因结构如图1所示。某课题研究组将LTP基因导入火龙果愈伤组织，以获得抗寒能力强的火龙果。回答下列问题：
1. （1）采用PCR技术克隆LTP基因时，为使目的基因能与图2所示的载体准确连接，将NcoI和BstEII两种限制酶的识别序列分别添加在引物、引物（填引物编号）的（填“3'端”或“5'端”）。
3. （2）将构建的表达载体与经处理获得的感受态根癌农杆菌混合，通过液体悬浮培养完成和细胞复苏，再将菌液涂布在含的培养基上培养，挑取单菌落进行PCR鉴定，以获得的根癌农杆菌。
5. （3）从田间取得的火龙果茎段经处理后，诱导其形成愈伤组织，加入（2）中获得的根癌农杆菌共同培养，再转入含抗生素的培养基，此时添加抗生素的主要目的是。
7. （4）经上述处理后的愈伤组织放入含X一Gluc的选择培养基中培养，选取色的愈伤组织，继续培养得到幼苗。为进一步确定该幼苗中的LTP基因是否表达，从转基因细胞中提取蛋白质，经处理固定在硝酸纤维素膜上，让待测蛋白质与发生抗原抗体杂交。除分子水平的检测方法外，还可以用。
  
  （注：图1箭头表示目的基因的转录方向；图2：NcoI和BstEII为不同限制酶的识别位点；T-DNA中标出的启动子属于真核细胞表达系统；GUS基因编码产生的β-葡萄糖苷酸酶能将无色物质X-Gluc分解，使植物组织呈蓝色，否则为白色）
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1. (2023高二下·联合期末) 生长素参与植物生长发育的调节，生长素运输蛋白（PINI）对IAA的极性运输具有重要作用。为研究³⁵S启动子（一种来自病毒的强启动子）能否引起下游基因的过量表达，研究人员将³⁵S启动子与PINI基因转入拟南芥，观察PINI过量表达对植物的影响。
1. （1）获取PINI基因的mRNA后，通过RTPCR扩增获取PINI基因（DNA）时所需要的酶是。每次PCR循环分为3步，其中所需温度最低的一步称为。
3. （2） PINI基因不能直接导入受体细胞，需要构建PINI表达载体。构建PINI表达载体的目的是。
5. （3）为将PINI基因以正确方向插入质粒需要双酶切。在设计引物时，需在引物的5＇端加入相应的酶切位点。据图分析，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是。
7. （4）提取转基因拟南芥的DNA，用相应引物扩增出³⁵S启动子和PINI基因，为检测目的基因是否导入拟南芥，应电泳检测扩增产物中的，不检测另一种的原因是。据图2可知，也可在个体水平上进行检测，方法是。
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1. (2023高二下·吉林月考) 利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。该技术生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙型肝炎表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品。下图为利用生物技术获得这一生物新品种和抗虫棉的过程，据图回答下列问题。
1. （1）在基因工程中，A表示，如果直接从苏云金杆菌中获得Bt基因，①过程使用的酶的功能特点是，B表示。
3. （2）在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用技术对目的基因进行了扩增，然后将目的基因与质粒组合形成了重组质粒。
5. （3）基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括哪些部分?。
7. （4）将目的基因导入受体细胞的过程中，在③过程中一般采用法；在②过程中一般采用技术，受体细胞一般是。
9. （5）由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法是。
11. （6）要确定目的基因(Bt基因)导入棉花细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：。
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1. (2023高二下·吉林期末) 科学家利用基因工程培育出了耐盐的转基因水稻新品系。下列有关叙述错误的是（）

A . 获得目的基因需用限制酶和DNA连接酶 B . 可通过农杆菌的感染以实现重组质粒导入受体细胞 C . 含耐盐基因的水稻细胞经植物组织培养可获得植株 D . 可用较高浓度的盐水浇灌以鉴定水稻植株的耐盐性

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