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  • 1. 研究人员利用AFPs抗冻基因和Ti质粒构建重组质粒,选择所需重组质粒转入番茄植株,培育抗冻番茄,主要操作过程如下图。抗冻番茄经低温诱导后可溶性蛋白均比对照明显增加,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到可溶性蛋白的C区和B区染色加深。已知三种限制酶的识别序列及酶切位点如下表所示。请回答下列问题:

      

    限制酶

    BamH I

    Bgl Ⅱ

    EcoR I

    识别序列及酶切位点

    —G↓GATCC

    —A↓GATCT

    —G↓AATTC—

    1. (1) 构建重组质粒时,应选择(酶)分别切割质粒和含AFPs抗冻基因的外源DNA。
    2. (2) 培育转基因植物时,常选择Ti质粒作为目的基因载体的原因是。将导入了表达载体的农杆菌与取自番茄的细胞共同培养,通过农杆菌的作用就可使目的基因进入番茄细胞,为筛选成功导入抗冻基因的番茄细胞,需在培养基中添加。通过过程④获得完整的植株,依据的原理是。与常规的种子繁殖方法相比,利用该技术培育抗冻番茄植株的优点是
    3. (3) 可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测经低温诱导后抗冻番茄植株中的可溶性蛋白,若,则表明AFPs基因已表达出相应的蛋白质;也可采用进行个体生物学水平的检测。