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  • 1. 火龙果在低温下幼嫩茎段会部分受到伤害,脂质转移蛋白(LTPs)被证实在植物抵抗低温胁迫中有重要作用,控制该蛋白合成的基因结构如图1所示。某课题研究组将LTP基因导入火龙果愈伤组织,以获得抗寒能力强的火龙果。回答下列问题:

    1. (1) 采用PCR技术克隆LTP基因时,为使目的基因能与图2所示的载体准确连接,将NcoI和BstEII两种限制酶的识别序列分别添加在引物、引物(填引物编号)的(填“3'端”或“5'端”)。
    2. (2) 将构建的表达载体与经处理获得的感受态根癌农杆菌混合,通过液体悬浮培养完成和细胞复苏,再将菌液涂布在含的培养基上培养,挑取单菌落进行PCR鉴定,以获得的根癌农杆菌。
    3. (3) 从田间取得的火龙果茎段经处理后,诱导其形成愈伤组织,加入(2)中获得的根癌农杆菌共同培养,再转入含抗生素的培养基,此时添加抗生素的主要目的是
    4. (4) 经上述处理后的愈伤组织放入含X一Gluc的选择培养基中培养,选取色的愈伤组织,继续培养得到幼苗。为进一步确定该幼苗中的LTP基因是否表达,从转基因细胞中提取蛋白质,经处理固定在硝酸纤维素膜上,让待测蛋白质与发生抗原抗体杂交。除分子水平的检测方法外,还可以用

      (注:图1箭头表示目的基因的转录方向;图2:NcoI和BstEII为不同限制酶的识别位点;T-DNA中标出的启动子属于真核细胞表达系统;GUS基因编码产生的β-葡萄糖苷酸酶能将无色物质X-Gluc分解,使植物组织呈蓝色,否则为白色)