1. 火龙果在低温下幼嫩茎段会部分受到伤害，脂质转移蛋白（LTPs）被证实在植物抵抗低温胁迫中有重要作用，控制该蛋白合成的基因结构如图1所示。某课题研究组将LTP基因导入火龙果愈伤组织，以获得抗寒能力强的火龙果。回答下列问题：

1. （1） 采用PCR技术克隆LTP基因时，为使目的基因能与图2所示的载体准确连接，将NcoI和BstEII两种限制酶的识别序列分别添加在引物、引物（填引物编号）的（填“3'端”或“5'端”）。
3. （2） 将构建的表达载体与经处理获得的感受态根癌农杆菌混合，通过液体悬浮培养完成和细胞复苏，再将菌液涂布在含的培养基上培养，挑取单菌落进行PCR鉴定，以获得的根癌农杆菌。
5. （3） 从田间取得的火龙果茎段经处理后，诱导其形成愈伤组织，加入（2）中获得的根癌农杆菌共同培养，再转入含抗生素的培养基，此时添加抗生素的主要目的是。
7. （4） 经上述处理后的愈伤组织放入含X一Gluc的选择培养基中培养，选取色的愈伤组织，继续培养得到幼苗。为进一步确定该幼苗中的LTP基因是否表达，从转基因细胞中提取蛋白质，经处理固定在硝酸纤维素膜上，让待测蛋白质与发生抗原抗体杂交。除分子水平的检测方法外，还可以用。

   

   （注：图1箭头表示目的基因的转录方向；图2：NcoI和BstEII为不同限制酶的识别位点；T-DNA中标出的启动子属于真核细胞表达系统；GUS基因编码产生的β-葡萄糖苷酸酶能将无色物质X-Gluc分解，使植物组织呈蓝色，否则为白色）