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1. (2024高二下·南湖月考) 研究人员利用农杆菌将外源基因A导入到水稻细胞中，然后通过植物组织培养技术获得了含有外源基因A的第一代水稻植株。图为重组Ti质粒示意图。下列叙述错误的是（）

A . 外源基因A必须整合在T-DNA片段内 B . 培养水稻细胞时需添加潮霉素进行筛选 C . 水稻的组织培养过程中需调整植物激素的比例 D . 第一代水稻植株中存在不含外源基因A的细胞

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1. (2024高二下·肇庆期中) 用氨苄青霉素抗性基因（Amp^R）、四环素抗性基因（Tet^R）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　）

A . 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 B . 若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C . 若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D . 若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落

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1. (2024高二下·信宜期中) 同尾限制酶简称同尾酶，指一类限制性核酸内切酶，它们的来源不同，能够对DNA切割产生相同的黏性末端，而其识别序列的特异性不同。下表中，属于同尾酶的组合是（）
限制酶名称
识别序列和切割位点
限制酶名称
识别序列和切割位点
BamH I
G↓ GATCC
Kpn I
GGTAC↓ C
EcoR I
G↓ AATTC
Sau3A I
↓GATC
Hind II
GTY↓RAC
Sma I
CCCT↓GGG
（注：Y=C或T；R=A或G ）

A . BamH I和Sau3A I B . EcoR I和Kpn I C . Sau3A I和Sma I D . Hind II和Sma I

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1. (2024高三下·广西模拟) Ti质粒上有vir区和T-DNA区，vir区决定T-DNA的转移。研究人员将vir区和T-DNA区分离，开发了包括微型Ti质粒和辅助Ti质粒的双元载体系统。利用该系统，将抗草甘膦基因（cp）导入大豆中，培育抗除草剂（草甘膦）的转基因大豆。回答下列问题：
1. （1）双酶切可将cp基因以正确方向插入微型Ti质粒。已知cp基因的a链为转录的模板链，则引物1和引物2的5'端应分别加入酶和酶的酶切位点。
3. （2）目的基因表达载体过大时难以操作，转化效率较低。研究人员在构建微型Ti质粒时删除了生长素基因和细胞分裂素基因，这样做的优点是（答出2点）。T-DNA从农杆菌转移到植物细胞中时始于右边界止于左边界，在T-DNA的转移过程中会出现不完整转移现象，若以绿色荧光蛋白基因（GFP）作报告基因研究T-DNA的转移，则GFP应构建在紧临（填“左”或“右”）边界的位置。
5. （3）将微型Ti质粒上重组了cp基因的农杆菌与含辅助Ti质粒的农杆菌混合，一定温度下保温一段时间，得到含双元载体的农杆菌。在含双元载体的农杆菌中，辅助Ti质粒的作用是。
7. （4）用含有cp基因表达载体的农杆菌侵染大豆愈伤组织，筛选出转cp基因的愈伤组织。诱导愈伤组织形成试管苗的过程，在植物组织培养中叫阶段。此阶段需要更换新的培养基，是因为。
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1. (2024·南宁模拟) 人神经生长因子（hNGF）是一种在神经细胞生长、分化和再生过程中起着重要作用的蛋白质，对治疗青光眼和阿尔茨海默病等神经性疾病有着良好的效果。科学家尝试利用转基因克隆猪作为生物反应器，在其唾液腺高效合成人神经生长因子（hNGF），过程如下图1所示，回答下列有关问题：
图1
1. （1）我国科学家利用重组DNA技术，将hNGF基因与表达载体连接，导入猪的成纤维细胞中构建高效表达hNGF基因的转基因克隆猪。hNGF基因仅在唾液腺表达，因为。若限制酶切割hNGF 基因和载体后形成相同的黏性末端，则会出现（答出2点）等情况，从而导致构建基因表达载体的成功率下降。
3. （2）转基因猪DNA的PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，结果如图2 所示。1号泳道以为标准，2号泳道为阳性对照（提纯的hNGF基因片段），3号泳道为实验组。若3号泳道有杂带（非目的DNA片段）出现，则原因可能是（答出2点）。
5. （3）为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶 Kdm4d。mRNA经技术注入了重构胚，推测该物质发挥作用的机制是。
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1. (2024·广西模拟) 葡萄酒中的氨基甲酸乙酯（EthylCarbamate，EC）是一种潜在致癌物，主要由尿素和乙醇反应生成。通过在亲本酿酒酵母菌株中，敲除一个拷贝的精氨酸酶基因CAR1，同时选用强启动子PGK1过表达脲基酰胺酶基因DUR1、2，来获得低产EC的重组酿酒酵母菌株。与亲本菌株相比，重组酿酒酵母菌株发酵性能及风味物质不受影响，尿素和EC的含量分别降低了40.38%和34.45%。满足葡萄酒相关领域对酵母的较高要求，有广泛的应用前景。
1. （1）下图为目的基因脲基酰胺酶基因DUR1、2的部分序列：
  模板链3'-TACTGTCAATCA……ATGACGGCCACT-5'
  编码链5'-ATGACAGTTAGT……TACTGCCGGTGA-3'
  利用PCR扩增目的基因应选择的一对引物是____。
3. （2）如图所示，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择（填写酶的具体名称）识别并切割质粒，再用DNA连接酶连接。氨苄青霉素抗性基因的作用是。
5. （3）已知目的基因上无相关酶切位点，应在引物的（填5'或3'）端设计酶切序列，目的基因上游设计的酶切序列+引物序列为5'--3'。
7. （4）已知DUR1、2基因的转录模板链为A链，如果采用一定方法将目的基因与质粒进行反向连接，构建出反义DUR1、2基因，则其转录模板链为链。将其导入之前的转基因工程菌中，其结果无法获得低EC产品，推测其原因可能是。
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1. (2024高二下·高州期中) 重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为科学家通过培育出转基因山羊生产rhTPO的过程。其中编号①-⑨表示过程，A表示含有rhTPO基因的DNA，四种限制性内切核酸酶的识别序列及切割位点见下表，请回答下列问题：
限制酶
BglⅡ
BamHI
HindⅢ
XbaI
识别序列和切割位点
G↓GATCC
A↓GATCT
A↓AGCTTT
↓CTAGA
1. （1） ②过程需要的限制性内切核酸酶是（从题干表格中选取）。为了使目的基因能够表达，构建重组质粒时，目的基因的上游必须有，其为酶的识别和结合部位。
3. （2）体外受精时需要将卵母细胞培养至期。将重组质粒导入受精卵的方法是。
5. （3）为使受体母羊更好的接受植入的胚胎，需提前对其进行处理；培育转基因羊的过程，用到的胚胎工程技术有（写出两种）。
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1. (2024高二下·浙江期中) 甲、乙两种单基因遗传病的家系图如图1，已知甲病是伴性遗传，人群中乙病的发病率为1/256（相关基因均不位于Y染色体上）。乙病相关基因经PCR扩增、限制酶剪切后，凝胶电泳分离DNA片段结果如图2下列叙述正确的是（）

A . 与正常基因相比，乙病基因多一个限制酶剪切位点 B . 若乙病基因与正常基因碱基数目相等，则两者控制合成的多肽链长度一定相同 C . II-2与II-3再生一个男孩，正常的概率是1/8 D . III-1与一正常男性结婚，后代患病概率为1/34

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1. (2024高二下·衡水期中) 下列有关重组DNA技术基本工具的叙述正确的是（　　）

A . DNA聚合酶是构建重组DNA分子必需的工具酶 B . 不同的限制酶切割产生的黏性末端一定不同 C . 相同黏性末端连接形成的DNA片段，一定会被原限制酶识别 D . 质粒做为基因工程常用的载体，并不是原核细胞特有的结构

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1. (2024高二下·信宜月考) 基因工程载体必须具备的条件中，错误的是（）

A . 载体必须是安全的，不会对受体细胞有害 B . 具有一或多个限制酶切点，以便与外源基因连接 C . 必须含有标记基因，标记基因的成功表达也就意味着目的基因成功表达 D . 载体必需具备自我复制能力或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制

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限制酶名称	识别序列和切割位点	限制酶名称	识别序列和切割位点
BamH I	G↓ GATCC	Kpn I	GGTAC↓ C
EcoR I	G↓ AATTC	Sau3A I	↓GATC
Hind II	GTY↓RAC	Sma I	CCCT↓GGG

限制酶	BglⅡ	BamHI	HindⅢ	XbaI
识别序列和切割位点	G↓GATCC	A↓GATCT	A↓AGCTTT	↓CTAGA