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1. (2024高二下·南海月考) 除草剂的有效成分草甘膦能够专一性抑制EPSP合成酶的作用，从而使植物多种代谢途径受影响而导致植物死亡。草甘膦没有选择性，除掉杂草的同时作物也会受损。培育抗草甘膦作物是解决办法之一，下列关于转入外源EPSP合成酶基因使矮牵牛抗草甘膦流程的叙述正确的是（　　）

A . 可以通过mRNA在逆转录酶的作用下构建cDNA文库，从中获取EPSP合成酶基因 B . 用限制酶和DNA连接酶处理目的基因和Ti质粒，仅涉及磷酸二酯键的断裂和形成 C . 基因表达载体组件中的起始密码子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 D . 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上，农杆菌的转化能使植物细胞都能培育出转基因植株

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1. (2024高三上·湖北期末) ga3ox能催化合成有活性的赤霉素，而ga2ox则能钝化有活性的赤霉素。MD为野生型矮牵牛品种，712-15和712-26是转入了ga3ox基因和ga2ox基因中的同一种基因的矮牵牛品种，但在基因组中插入的位置不同。在相同环境下种植，三个品种的株高有明显差异，表现为MD>712-15>712-26．

（1） ga3ox的作用机理是，赤霉素通过来增加植株高度。
（2） 712-15品种和712-26品种都是转入了（填“ga3ox”或“ga2ox”）基因，但两者的株高却有显著差异，表明。

（3）有人猜测，株高的调控是通过蛋白P41与蛋白P42或蛋白P45结合实现的，科研人员依据以下原理研究蛋白P41与蛋白P42、蛋白P45之间的关系：在酵母菌细胞中，可以利用基因工程表达出两种融合蛋白（BD—待测蛋白X、AD—待测蛋白Y），若两种待测蛋白可以相互作用，则AD蛋白和BD蛋白就能充分接近形成复合物，并启动组氨酸合成基因的转录（如图1），否则组氨酸合成基因不能转录（如图2）。

由此，科研人员做了如下实验。

第一步：构建以下5组重组载体，

	重组载体包含的部分基因
载体1	AD蛋白基因色氨酸合成基因
载体2	BD蛋白基因亮氨酸合成基因
载体3	AD蛋白基因蛋白P41基因色氨酸合成基因
载体4	①基因蛋白P42基因亮氨酸合成基因
载体5	BD蛋白基因 ②基因亮组氨酸合成基因

上表空格相应的基因分别为①；②。

第二步：将载体1和载体2、载体1和载体4、载体1和载体5、载体2和载体3、载体3和载体4、载体3和载体5分别导入六组不能合成色氨酸、亮氨酸和组氨酸的酵母菌。

第三步：将上述六组酵母菌依次涂布至不含色氨酸、亮氨酸的培养基a~f中，均能长出菌落，原因是。

第四步：再将a~f培养基上的菌落对应拓印（原位接种）至不含色氨酸、亮氨酸和组氨酸培养基A~F中，结果只有F中长出菌落，则本实验的结论是。

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1. (2024高三上·扬州期末) 人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，由a链和β链（hCGβ）结合而成。近年研究显示，hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞，与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题：
注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
1. （1）图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是。
3. （2）当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替将目的基因导入基因表达载体的方法。
5. （3）阶段Ⅱ将环化质粒导入用处理的大肠杆菌，然后在含有的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
7. （4）为了检验重组质粒是否构建成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物进行PCR扩增，则最好选择图2中的引物。PCR反应体系中需加入模板、、、引物、Mg²⁺、缓冲液等，再将扩增产物进行来确定可用于导入酵母菌的重组质粒。
9. （5）阶段IV需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分（a．氨苄青霉素b．组氨酸c．无机盐d．琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，用进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。
11. （6）从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是。
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1. (2024高三下·成都开学考) 有些人由于乳糖酶分泌少，不能完全消化牛奶中的乳糖，饮用牛奶后易出现腹泻等不适症状，这称为乳糖不耐受。为了解决这一问题，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，使获得的转基因奶牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响。根据如下操作流程回答相关问题：
1. （1）通过图中②过程采集的B奶牛精子不能直接使成熟的卵细胞受精，常要用化学诱导法对奶牛的精子进行处理，即用一定浓度的处理。
3. （2）为了获得更多的卵母细胞，在进行①过程前，需要用处理奶牛A，从输卵管中采集卵母细胞后，还需要体外培养至期，才可以进行③过程；③过程表示的胚胎工程技术为。
5. （3） ④过程表示基因表达载体的建构过程，概述其操作流程。
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1. (2024·高三上期末·潮州) 成纤维细胞生长因子21（FGF21）是一种调节机体代谢的分泌型蛋白，具有降低血糖、提高胰岛素敏感性等生理活性。但由于FGF21稳定性差，导致FGF21药效较差。科研人员以含有FGF21基因（F）的重组质粒pSUMO-FGF21（p-F）为模板，对F进行定点突变，构建含突变基因的突变质粒PSUMO-mmtFGF21（p-mF），从而实现对FGF21的改造，部分过程如图1所示。据图回答下列问题：
1. （1）研究发现、改变FGF21中的氨基酸序列，可提高FGF21的稳定性。这首先需要在数据库中检索FGF21的氨基酸序列和，据此设计突变位点并对蛋白质结构进行模拟验证。
3. （2）通过PCR技术可实现对FGF21基因（F）进行定点突变。
  ①将引物、p-F（DNA模版）、缓冲液、无菌水、4种脱氧核苷酸和等加入微量离心管中，构成PCR体系进行反应。
  ②用于定点突变的引物长度不能过短，否则会由于，导致定点突变失败。
  ③应选择图2中的哪对引物进行定点突变。
  A.1和4
  B.2和3
  C.1和3
  D.2和4
5. （3）在转化大肠杆菌时，用低温和溶液处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞，有利于突变质粒进入大肠杆菌中。培养一段时间后，取适量菌液涂布在含有平板上筛选出含p-mF的细胞（菌落）。
7. （4）已筛选出含mF的大肠杆菌繁殖的后代中出现不含有mF的菌体，为了解决这一问题，最佳的方案是。
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1. (2024·河南模拟) 水稻胚乳可作为生物反应器用于开发功能性产品。从猪瘟病毒抗原蛋白的预期功能出发，研究小组设计其预期的结构，推测应有的氨基酸序列，合成新的基因X。利用PCR技术对其进行扩增并连接启动子1，形成Z片段。把Z片段插入Ti质粒的T-DNA中，将构建好的基因表达载体导入水稻细胞完成转化，在胚乳中获得相应蛋白，最终将蛋白进一步加工为植物源猪瘟疫苗。相关信息如图所示。
回答下列问题。
1. （1）研究小组通过PCR扩增Z片段，延伸过程中，4种脱氧核苷酸在催化作用下合成新的DNA链。酶切时，限制酶识别序列的重叠会降低切割效率。为构建基因表达载体，选择限制酶Hind Ⅲ和进行切割，可使Z片段插入T-DNA的效率最高。为使基因能够正常表达，质粒上的N和J应都为。
3. （2）为获得含蛋白X的水稻材料，首先诱导水稻种子脱分化形成，然后通过的侵染，使目的基因进入水稻细胞并完成转化，再将其转接到含特定激素的培养基上，诱导其形成具有根、茎、叶的完整植株。
5. （3）为验证水稻中目的基因X是否表达（转录和翻译），分子水平上的检测方法有（答出2点即可）。
7. （4）从猪瘟病毒抗原蛋白的预期功能出发，合成基因X，进而得到猪瘟疫苗的过程属于工程的范畴。相较于大肠杆菌，水稻胚乳作为生物反应器制备疫苗的优势及理由有（答出1点即可）。
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1. (2024·贵州模拟) 风肉一般是以鲜肉为原料，用食盐腌制后，经风干和微生物后发酵而成。在后发酵期，风肉含有耐盐的微生物。某实验小组为研究耐盐微生物的耐盐基因，设计实验如下。回答下列问题。
1. （1）实验小组为获得耐盐纯培养物A，使用的培养基应是（选填“普通培养基”或“选择培养基”），使用的接种方法是。
3. （2）为获得纯培养物A的耐盐基因X，实验小组应用纯培养物提取了DNA。在一定温度下，用二苯胺试剂对DNA进行检测，二苯胺检测DNA的原理是。获得PCR产物后，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定，影响DNA分子迁移速率的主要因素有（答出两点即可）。
5. （3）构建成功的表达载体将运用农杆菌介导技术转入某农作物，可获得耐盐转基因植株。与同种非转基因植株的染色体DNA序列相比，转基因植株的染色体DNA含有。
7. （4）为验证已获得的耐盐转基因植株具有耐盐性，需设计实验。写出实验思路。
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1. (2024·贵州模拟) 我国科学家将外源生长激素基因导入鲤鱼的受精卵并整合到染色体DNA上，培育出转基因鲤鱼。与普通鲤鱼相比，转基因鲤鱼的生长速率加快。下列叙述正确的是（）

A . 外源生长激素基因导入鲤鱼受精卵后没有定向改变性状 B . 转基因鲤鱼的外源生长激素基因的表达都在细胞核进行 C . 转基因鲤鱼的外源生长激素基因遗传时不遵循遗传定律 D . 外源生长激素基因的氢键断裂后利于该基因复制或转录

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1. (2024·黑龙江模拟) 植物在高于胞内Na⁺浓度的环境下，SOS3和SOS2激活位于质膜上的转运蛋白SOS1，SOS1通过SOS信号通路与胞质内Na⁺结合并将其排出细胞外，维持其正常生命活动。回答下列问题：
1. （1）植物利用SOS信号通路将Na⁺排出细胞外，这种运输方式的特点是。
3. （2）通过基因工程在水稻中过量表达SOS1蛋白，以期增强水稻抗盐能力。
  ①为获得编码SOS1蛋白的基因，可提取野生型水稻总RNA，通过获得模板DNA，再经PCR获得SOS1基因片段。
  ②测序表明，SOS1基因编码序列含有3444个核苷酸，其中A+T含量占53%，模板链中C含量为26%，那么SOS1基因双链序列中G+C的含量为%。
  ③构建表达载体时，在下图所示载体含有的限制酶识别位点插入SOS1基因。序列分析发现SOS1基因内部有XbaⅠ的识别序列，为使载体中SOS1基因和绿色荧光蛋白基因正确表达，应在SOS1基因两端分别添加两种限制酶的识别序列，将SOS1基因插入载体前，应选用两种限制酶对载体酶切。
5. （3）重组质粒转化水稻后，选取可发绿色荧光的植株，鉴定其抗盐能力是否增强，采取的操作是。
7. （4）若发现水稻中过量表达SOS1基因并不能明显提高其抗盐能力，从信号通路角度分析，可能的原因是。
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1. (2024·甘肃模拟) 胰岛素可用于治疗糖尿病，我国科学家打破国外技术垄断，研发了拥有自主知识产权的重组人胰岛素药物，下列叙述错误的是（）

A . 用PCR技术扩增人胰岛素基因时，每次循环包括变性、复性、延伸三步 B . 构建人胰岛素基因表达载体时，需使用限制性内切核酸酶和DNA连接酶 C . 大肠杆菌细胞经Ca²⁺处理后，更容易吸收重组的人胰岛素基因表达载体 D . 抗原-抗体杂交法不能检测人胰岛素基因表达载体是否导入大肠杆菌细胞

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