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1. (2024高三下·梅州模拟) 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述正确的是（）

A . 为构建正确连接的表达载体，应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶 B . PCR扩增目的基因过程中每次循环都要经历一次升温和两次降温 C . 表达载体导入受体细胞后，可用含四环素的选择培养基进行初步筛选 D . 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功

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1. (2024高三下·湛江模拟) 研究低温条件下番茄细胞WHYI基因对光合作用的影响，对于温度敏感型蔬菜作物的栽培具有重要的实践意义。回答下列问题：
1. （1）研究人员利用重组DNA 技术，将克隆的WHYI基因与外源高效启动子连接，导入番茄基因组中构建WHYI基因的过表达植株（W⁺），如图1所示。启动子是识别、结合酶的部位。若限制酶切割WHYI基因和番茄基因组后形成相同的黏性末端（即图中Ⅰ、Ⅱ处），则会出现（答出2点）等情况，从而导致构建过表达植株的成功率下降。
3. （2） PCR 的产物一般通过电泳来鉴定，结果如图2所示。1号泳道为标准，2号泳道为阳性对照（提纯的相关蛋白基因片段），3号泳道为实验组。1号泳道的条带实质为，若3号泳道有杂带（非目的DNA片段）出现，则原因可能是（答出2 点）。
5. （3）小干扰 RNA（siRNA）能诱导特定基因转录出的 mRNA降解，导致基因沉默。研究人员据此构建了 WHYI 基因的沉默植株（W^-），siRNA因阻断了过程而关闭了WHYI基因。进一步研究发现，番茄细胞WHYI基因影响光反应阶段D1蛋白（可捕捉光能）的含量，且与温度有关。研究人员用特定抗体检测D1蛋白在叶绿体内的含量，结果如表所示。该实验中的自变量为，对比三种番茄的D1蛋白含量可得到的结论是。
  温度
  25 ℃
  4℃
  植株类型
  W⁺
  W
  W^-
  W⁺
  W
  W^-
  D1 蛋白含量
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1. (2024高三下·湛江模拟) 研究发现，若将第52位的脯氨酸（密码子为 CCA）替换成苏氨酸（密码子为 ACA），则可增强抗菌肽的抑菌性。抗菌肽基因的部分碱基序列及可供选择的引物如图1所示，箭头下方的数字代表碱基序号。现利用重叠延伸 PCR 技术对抗菌肽基因进行改造以获得抑菌性更强的抗菌肽，过程如图2所示，其中Ⅰ为转录模板链，引物上的“·”代表突变位点。改造过程中 PCR2所使用的引物组合为（）

A . 引物1和引物4 B . 引物2和引物6 C . 引物2和引物4 D . 引物3和引物5

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1. (2024·贵州模拟) 科学研究过程中，常需要从生物材料中分离和提取某些物质或组分。下列叙述错误的是（）

A . 小鼠成熟红细胞是提取纯净细胞膜的理想材料 B . 叶绿素a在层析液中的溶解度大于叶绿素b C . 凝胶电泳可分离DNA，差速离心可分离各种细胞器 D . DNA在酒精中溶解度较大，蛋白质几乎不溶于酒精

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1. (2024高三下·贵阳模拟) CRM1是一种核转运蛋白，由CRMI基因控制产生，转运含有NES序列的货物蛋白。科学研究发现，肿瘤细胞中CRMI基因过度表达，含有NES序列的肿瘤抑制因子被过量地转运至细胞质，使得它们无法在细胞核内发挥正常功能，会促进肿瘤的发生及生长。为探究CRM1的运输机制及肿瘤的治疗，科学家进行了相关研究。请回答下列问题：
1. （1）研究人员利用PCR技术大量扩增CRMI基因，需要根据设计两种引物，引物的作用是。
3. （2） CRM1 C528S是CRM1突变体，不具有运输能力，GST-NES为某种肿瘤抑制因子，CRM1蛋白可能与货物蛋白的转运有关，研究人员利用上述物质设计实验进行跨膜模拟，结果发现只有③组实现了对GST-NES的跨膜转运，据此可推断。
  
  ①
  ②
  ③
  ④
  GST-NES
  +
  +
  +
  +
  CRM1
  -
  +
  +
  -
  RanGTP
  -
  -
  +
  +
  CRM1 C528S
  -
  -
  -
  +
  注：“+”表示有；“-”表示无。
5. （3）科学家利用计算机成功筛选出了与货物蛋白结构相似的小分子 KPT，并将其制备成抑制肿瘤细胞药物，推测KPT的作用机理是。
  请设计实验验证上述推论，写出实验思路和预期结果。（材料：肿瘤小鼠模型若干只、正常小鼠模型若干只、小分子 KPT。注：药物处理方法与肿瘤的具体检测方法不做要求）
  实验思路：。
  预期结果：。
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1. (2024高三下·楚雄模拟) 二十碳五烯酸（EPA）能促进体内饱和脂肪酸代谢，具有降低血液黏稠度、预防心脑血管疾病的功效。研究人员利用转基因技术从海洋生物中提取了EPA合成途径的关键基因pfaB，并将其导入酵母菌内，通过酵母菌发酵生产EPA。图1和图2分别是转基因过程中使用的含目的基因的DNA片段和质粒。回答下列问题：
1. （1）为确保目的基因导入酵母菌后能稳定复制和表达，需要在图2质粒中加入（答出三点）等结构才行。若要将pfaB基因导入植物细胞，可采用（填一种）法。
3. （2）据图可知，为了使目的基因和质粒定向连接，构建重组质粒时应选择限制酶对基因pfaB和质粒进行切割。用PCR技术对基因pfaB进行扩增时，要向仪器中加入足量的引物（填图1中数字），以保证扩增的正常进行。PCR缓冲液中要添加适量的Mg²⁺ ，其目的是。PCR结束后可采用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定，一定pH下，在电场中，DNA分子会向着的电极移动，DNA分子在凝胶中的迁移速率与（填两种）等因素有关。
5. （3）有人认为将基因pfaB导入大肠杆菌细胞中，无法得到具有相应生理功能的表达产物，其理由是。
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1. (2024高三下·昭通模拟) 今年4月27日，大熊猫“丫丫”回国在社会上引起了巨大反响。自然状态下的大熊猫繁殖能力较低，曾一度濒临灭绝，我国科学家利用胚胎工程的技术手段大大提高了熊猫的繁殖率，目前我国的熊猫数量已经有2400余只。请回答下列问题：
1. （1）大熊猫主要以竹子为食，研究人员为了从大熊猫粪便中筛选出纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以为唯一碳源的固体培养基上进行培养。配制的培养基可用方法进行灭菌处理。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是。
3. （2）大熊猫体内受精受孕率低，可利用体外受精。受精前需要对采集的精子进行处理，收集的卵母细胞要培养至期。
5. （3）为了进一步提高熊猫的产子率，科学家用了胚胎分割技术，该技术属于（填“有性”或“无性”）生殖，进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的。胚胎移植前有时需进行性别鉴定，目前SRY-PCR技术是哺乳动物性别鉴定最有效的方法，操作的基本程序是：从被测的囊胚中取细胞，提取DNA，然后用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）的一段碱基序列作为，用被测胚胎DNA作模板进行PCR扩增，若通过鉴定，出现阳性反应的胚胎为雄性。
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1. (2024高三下·云南模拟) 鸭坦布苏病毒感染鸭、鹅等多种禽类，给禽类养殖业带来严重危害。科研人员通过基因工程获取该病毒的prM蛋白用于制备单克隆抗体。为了鉴定单克隆抗体识别prM蛋白的具体区域，将prM蛋白逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如下图（“aa”表示氨基酸，“＋”表示有反应，“－”表示无反应）。
回答下列问题。
1. （1）通过基因工程获取prM蛋白，需要利用技术快速扩增目的基因，与生物体内DNA复制相比，该技术所需酶的特殊性在于，反应过程中复性的结果是。
3. （2）用prM蛋白为抗原制备单克隆抗体，需用纯化的prM蛋白对小鼠进行免疫，其目的是获得细胞，并将该细胞与骨髓瘤细胞融合，对经选择培养的杂交瘤细胞进行培养和，多次筛选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再将其注射到小鼠的腹腔内增殖、合成抗体。
5. （3）根据图示实验结果分析，该单克隆抗体识别prM蛋白的区域大概为（填“40~50”“40~55”或“40~60”）位氨基酸。
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1. (2024高三下·西山模拟) 多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育转fat1基因猪，操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。看图回答下列问题：
1. （1）用PCR技术在体外扩增目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、（至少答两点）等。
3. （2）从图中可知，在构建基因表达载体时，为克服目的基因自身环化，即线性DNA的末端相互连接，变圆环，以及便于目的基因与载体的连接，切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用和。
5. （3）构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是。除GFP基因外，未标注出的必需元件还有。
7. （4）猪成纤维细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期，以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为，操作时首先用处理成细胞悬液。
9. （5）经检测，fat1基因成功整合在猪基因组DNA后，（填“能”或“不能”）说明成功培育转基因猪，理由是。
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1. (2024高二下·仁寿期中) 在利用洋葱进行“DNA的粗提取和鉴定”的实验中，相关操作正确的是（）

A . 研磨洋葱时，加入适量的研磨液瓦解细胞膜，充分释放核DNA B . 利用定性滤纸进行过滤，以去除杂质，提高DNA的含量和纯度 C . 向DNA滤液中加入等体积、预冷的50%酒精，以获得DNA粗提物 D . 将白色丝状物加入4mL二苯胺试剂中沸水浴，以利于发生颜色反应

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