1. 多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育转fat1基因猪，操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。看图回答下列问题：

1. （1） 用PCR技术在体外扩增目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、（至少答两点）等。
3. （2） 从图中可知，在构建基因表达载体时，为克服目的基因自身环化，即线性DNA的末端相互连接，变圆环，以及便于目的基因与载体的连接，切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用和。
5. （3） 构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是。除GFP基因外，未标注出的必需元件还有。
7. （4） 猪成纤维细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期，以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为，操作时首先用处理成细胞悬液。
9. （5） 经检测，fat1基因成功整合在猪基因组DNA后，（填“能”或“不能”）说明成功培育转基因猪，理由是。