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1. (2024高二下·信宜期中) “DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程如下图。下列选项是某同学的总结，其中叙述错误的是（）

A . ①过程为裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质 B . ②过程为分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等 C . ③过程为沉淀：反复多次可以完全去除蛋白质杂质 D . ④过程为鉴定：在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色

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1. (2024高二下·旌阳月考) 下列关于生物工程相关知识的叙述，正确的项数是（）
①植物组织培养过程中愈伤组织的代谢类型是自养需氧型

②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，在聚乙二醇的诱导下，融合成的细胞只有杂交瘤细胞

③若要生产转基因抗病棉花，可将目的基因先导入到土壤农杆菌中，再转入棉花细胞中

④基因治疗是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的

⑤PCR技术需要利用限制性核酸内切酶打开DNA双链

⑥牛胚胎发育的历程是：受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体

⑦利用植物茎尖培养脱毒苗时，全程都需要光照

A . 2项 B . 3项 C . 4项 D . 5项

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1. (2024高三下·广州模拟) 柑橘酸腐病是由白地霉引起的柑橘贮藏期常见的病害之一。抗菌肽是一种抑菌活性强、无环境污染的生物多肽，目前已用于多种农业病菌的防治。研究人员研究了抗菌肽对白地霉的抑菌效果，并且对其作用机制进行了探究。回答下列问题：

（1）利用基因工程合成抗菌肽时，基本流程为：克隆目的基因→导入枯草杆菌→筛选菌种→诱导抗菌肽表达→分离纯化→功能研究。利用PCR技术克隆目的基因的过程中，将温度冷却至55～60℃的目的是。
（2）白地霉从柑橘中获得其生长繁殖所需的水、无机盐、和等营养物质。

（3）为研究抗菌肽对白地霉的抑菌效果，现用无菌打孔器在果实相同部位打孔，每个打孔处接种相同体积的处理液，比较15天后的病斑直径。各组处理及结果见表。

组别	1	2	3	4	5
接种处理方式	接种一定体积的病原菌孢子悬浮液	抗菌肽溶液与病原菌孢子悬浮液混合后直接接种	先加入抗菌肽溶液，2h后接种病原菌孢子悬浮液	X	抗菌肽溶液与病原菌孢子悬浮液混合，培养2h后接种
15天后病斑直径/mm	41.3	13.9	29.3	28.7	11.2

表中数据表明抗菌肽对白地霉有一定的抑菌效果，且抑菌效果与抗菌肽、病原菌孢子悬浮液接种顺序有关，表中X为。与第2组相比，第5组抑菌效果更好的可能原因是。

（4）一般情况下，电导率和离子浓度呈正相关，通过测量溶液电导率可以反映出溶液中离子浓度的大小。研究人员将白地霉孢子与抗菌肽在无菌水中混合，测定电导率，培养一段时间后，再次测定电导率，结果发现电导率明显升高，据此推测抗菌肽抑制白地霉孢子的作用机制可能是。

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1. (2024高三下·番禺模拟) 中药红花中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）因在植物发育中对植物次生代谢产物的调控和对环境刺激的响应而被广泛研究。研究人员从红花盛花期花瓣中提取了总RNA，通过转基因实现了PAL基因（2124bp）在红花悬浮细胞中的超表达（具体过程见下图），为研究PAL基因在红花次生代谢产物代谢途径中的功能和对环境刺激的响应奠定了基础。请回答下列问题：
1. （1）次生代谢产物一般（填“是”或“不是”）植物基本生命活动所必需的。从红花盛花期花瓣中提取总RNA的理由是。
3. （2） RT-PCR是将mRNA逆转录和cDNA的聚合酶链式反应相结合的技术。若要在该体系中通过①从总RNA中扩增出PAL基因的cDNA，应加入的2种引物。
5. （3）构建质粒2时，需要利用限制酶BglⅡ和BstEⅡ对图中PAL基因和质粒1进行双酶切；验证质粒2是否构建成功时，若用上述双酶切质粒后电泳得到两种条带，（填“能”或“不能”）说明质粒2构建成功，请说明理由：。
7. （4） GUS基因的表达产物能催化X-Gluc（一种无色物质）分解为蓝色物质，实验农杆菌和红花细胞中均无该基因。加工质粒1时，引入GUS基因可以起到的作用；选择悬浮细胞而不是愈伤组织作为PAL的生物反应器的原因是。
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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 甲胺磷是一种广谱、高效、剧毒的有机磷杀虫剂，曾被长期大量使用，引起水体、土壤污染，严重破坏了环境生态平衡，同时危害到人畜健康。利用微生物降解甲胺磷农药是解决使用甲胺磷带来的环境污染的有效途径。回答下列问题：
1. （1）筛选获得甲胺磷降解菌：选择长期使用甲胺磷农药的农田的土壤为样品，将获得的样品用无菌水稀释后接种于添加了的选择培养基上进行培养，可以分离出能分泌甲胺磷降解酶的细菌。甲胺磷被降解后平板上会出现透明圈，应挑取的单菌落在选择性固体培养基上进行重复划线、分离和纯化。
3. （2）测定甲胺磷降解率：选择三种菌株对甲胺磷进行降解，降解情况如图所示，其中降解甲胺磷效果最好的菌株是，该菌株培养时间与甲胺磷降解率的关系为。
5. （3）构建降解甲胺磷工程菌：将提取和分离得到的甲胺磷降解酶进行氨基酸序列测定，根据得到的氨基酸序列推出，然后设计合成引物，通过技术扩增出甲胺磷降解酶基因。后经一系列过程，获得高表达的降解甲胺磷工程菌。
7. （4）转基因工程菌在自然界的扩散可能会带来生态风险。为此，科研人员利用以下材料，设计了可被诱导而自毁的甲胺磷工程菌。所需材料和结构有：
  ①质粒
  ②IPTG（一种模拟异乳糖的试剂，可去除lac启动子中的阻遏物以诱导基因表达）
  ③lac启动子
  ④核酸水解酶基因
  其具体设计思路是将（填序号）构建成重组载体，导入工程菌。需自毁时外源增加（填序号）进行诱导，引发甲胺磷工程菌自毁。
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1. (2024·揭阳模拟) 病毒X为RNA病毒，有多种亚型，不易研制相应的疫苗。科研工作者运用基因工程技术发明了一种制备病毒X活疫苗的方法，通过该方法制备的疫苗可以预防4种亚型的病毒X，该过程分为如下4个步骤。回答下列问题：
1. （1）步骤I：改造病毒X的部分基因。该步骤可以使病毒X失去在正常宿主细胞内增殖的能力。该过程以病毒X的RNA为模板，通过逆转录获取对应的DNA片段后，再通过PCR技术扩增DNA。
  ①逆转录和PCR两个过程中利用的原料均是。
  ②科研工作者将获取的DNA中的某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的碱基序列替换成编码终止密码子的碱基序列。与改造前相比，改造后的病毒X不能复制产生子代病毒，推测其原因可能是。
3. （2）步骤Ⅱ：构建重组表达载体。科研工作者将改造后的基因及4种病毒X表面抗原等其他基因一起构建重组质粒，并保存。构建表达载体时须将改造后的基因及4种病毒X的表面抗原等基因置于启动子和之间，启动子是识别和结合的位点。
5. （3）步骤Ⅲ：构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物的反密码子能与（1）中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸Uaa。将该基因与载体连接后导入宿主细胞。筛选和鉴定获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞，提取宿主细胞的全部RNA，用放射性同位素标记的特殊tRNA的基因与之杂交，结果出现了RNA—RNA杂交带。该检测方法的原理是，结果说明。
7. （4）步骤Ⅳ：利用转基因宿主细胞制备疫苗。将（2）中的重组质粒导入（3）中的转基因宿主细胞，并在补加的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA翻译出改造后的病毒X基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，该子代病毒不经灭活或减毒即可制成疫苗。与其他活疫苗相比，该疫苗无致病性，更安全，且可预防多种由病毒X引起的疾病，原因是。
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1. (2024·揭阳模拟) 下列有关高中生物学实验的叙述，错误的是（　　）

A . 调查草地中某双子叶杂草的密度时，要随机取样 B . 探究酶的专一性时，自变量可以是底物的种类 C . 家庭制作泡菜时，使用的食盐量不能太多 D . 进行DNA的粗提取与鉴定时，体积分数为95%的酒精用来消毒

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1. (2024·南宁模拟) 下列有关高中生物学实验的叙述，错误的是（　　）

A . 调查草地中某双子叶杂草的密度时，要随机取样 B . 探究酶的专一性时，自变量可以是底物的种类 C . 家庭制作泡菜时，使用的食盐量不能太多 D . 进行DNA的粗提取与鉴定时，体积分数为95%的酒精用来消毒

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1. (2024·广西模拟) 葡萄酒中的氨基甲酸乙酯（EthylCarbamate，EC）是一种潜在致癌物，主要由尿素和乙醇反应生成。通过在亲本酿酒酵母菌株中，敲除一个拷贝的精氨酸酶基因CAR1，同时选用强启动子PGK1过表达脲基酰胺酶基因DUR1、2，来获得低产EC的重组酿酒酵母菌株。与亲本菌株相比，重组酿酒酵母菌株发酵性能及风味物质不受影响，尿素和EC的含量分别降低了40.38%和34.45%。满足葡萄酒相关领域对酵母的较高要求，有广泛的应用前景。
1. （1）下图为目的基因脲基酰胺酶基因DUR1、2的部分序列：
  模板链3'-TACTGTCAATCA……ATGACGGCCACT-5'
  编码链5'-ATGACAGTTAGT……TACTGCCGGTGA-3'
  利用PCR扩增目的基因应选择的一对引物是____。
3. （2）如图所示，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择（填写酶的具体名称）识别并切割质粒，再用DNA连接酶连接。氨苄青霉素抗性基因的作用是。
5. （3）已知目的基因上无相关酶切位点，应在引物的（填5'或3'）端设计酶切序列，目的基因上游设计的酶切序列+引物序列为5'--3'。
7. （4）已知DUR1、2基因的转录模板链为A链，如果采用一定方法将目的基因与质粒进行反向连接，构建出反义DUR1、2基因，则其转录模板链为链。将其导入之前的转基因工程菌中，其结果无法获得低EC产品，推测其原因可能是。
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1. (2024高三下·广西模拟) 研究发现，成年小鼠的Y染色体上双外显子SRY（SRY-T）才是真正的睾丸决定因素。缺少SRY-T的雄性小鼠（XY）发育为雌性，而携带SRY-T转基因的雌性小鼠（XX）发育为雄性。请回答问题：
1. （1）要确定从Y染色体上获得的DNA片段中是否含有SRY-T，先获得相应DNA片段并进行PCR扩增，扩增时需要种引物。PCR扩增过程中温度呈“升温→降温→升温”的周期性变化，“降温”的作用是。对扩增产物进行检测时用作为探针，若出现杂交带，则（填“含有”或“不含有”）SRY-T基因。
3. （2）图为验证SRY-T能决定雄性性别的实验过程，将含SRY-T的基因表达载体导入小鼠（性染色体为XX）体内，导入雄原核的原因是。
5. （3）植入代孕母鼠的小鼠早期胚胎性染色体需要为XX，可检测囊胚期细胞进行筛选。进行胚胎移植时代孕母鼠是（答出2点即可）的个体。在获得的子代小鼠中出现（填“雄性”或“雌性”）小鼠，证明SRY-T基因决定雄性性别。
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