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1. (2024高三上·徐州期末) 利用新冠病毒（SARS-CoV-2）包膜表面的S蛋白研发的疫苗已在我国广泛接种。下图表示制备疫苗的相关过程，其中m、n分别是启动子和终止子，箭头处是限制酶的切点，SUC2是酵母菌的蔗糖转化酶基因，其终产物存在于液泡中，可以催化蔗糖水解成单糖被细胞利用。下表是可供选择使用的限制酶及其识别序列和切割位点。
限制酶
BamHI
NheI
NcoI
SphI
Sau3AI
识别序列和切割位点
5'-G↓CTAGC-3'
5'-G↓GATCC-3'
5'-C↓CATGG-3'
5'-GCATG↓C-3'
5'-↓GATC-3'
1. （1）上图②过程所使用的两种酶是，选择两种酶切割的优点是。
3. （2）由上图推测，目的基因S表达的模板链是a链，理由是；该目的基因的表达离不开m，原因是。
5. （3） RT-PCR是将RNA逆转录（RT）和聚合酶链式反应（PCR）相结合的技术。利用S蛋白的RNA作为模板进行过程①，首先需要加入缓冲液、原料、酶I、引物I等物质后进行RT，获得单链DNA后，还需要添加与单链DNA互补的引物II及酶II，在PCR过程中酶I所处的状态是。以一个单链DNA为起点，进行n次循环的扩增，理论上需要个引物Ⅱ；PCR每次循环一般可以分为变性、、延伸三步。
7. （4） SUC2作为B上的标记基因，可以对导入B的酵母菌进行筛选。筛选时，需要使用以蔗糖为唯一碳源的培养基，对受体突变型酵母菌的要求是。
9. （5）与普通灭活或减活疫苗相比，上述方法制备的疫苗对人体更安全，主要原因是。
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1. (2024高三下·内江月考) 为使玉米获得抗除草剂性状，科研人员进行了相关操作（如图所示）。含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，其正确表达产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。回答下列问题：
1. （1）为获取大量除草剂抗性基因G的拷贝，一般采用技术进行扩增，扩增时，冷却至55～60℃的目的是。在用除草剂抗性基因G与Ti质粒构建基因表达载体的过程中，用到的工具酶有。
3. （2）将含除草剂抗性基因G的重组Ti质粒转入农杆菌，为提高基因表达载体进入农杆菌的效率，需要用Ca²⁺处理细胞，其目的是。在“筛选1”中含氨苄青霉素的培养基能将成功导入表达载体的农杆菌筛选出来，而含无色物质K的培养基却不能，原因是。
5. （3）利用进行筛选2，更易于获得抗除草剂的转基因植株。从步骤①到步骤②需要更换新的培养基，原因是。
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1. (2024高三上·娄底月考) 野生玉米“大刍草”经过9000多年人工驯化，被改造成现代玉米。我国中科院科学家经过不懈努力，从野生玉米中成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP9，克隆出来并将此高蛋白基因转移到玉米细胞内，获得了转基因高蛋白玉米新品种。构建基因表达载体时，若科研人员需将THP9基囚整合到质粒上（如图）。回答下列问题：
EcoRⅠ
BamHⅠ
KpnⅠ
MfeⅠ
HindⅢ
1. （1）扩增优良基因THP9使用技术，依据的原理是，扩增时，需在耐高温的DNA聚合酶催化下，在引物端进行DNA链的延伸。
3. （2）构建基因表达载体时，为获得能正确表达THP9基因的重组质粒，具体操作是。
5. （3）采用农杆菌转化法将优良基因THP9导入玉米细胞中，在含氨苄青霉素的培养基上培养获得的菌落不一定含有重组质粒，原因是。将新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共同培养，筛选转化细胞并培育成转基因植株。欲从个体水平检测转基因玉米是否培育成功，实验方法是。
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1. (2024高三上·娄底期末) 野生玉米“大刍草”经过9000多年人工驯化，被改造成现代玉米。我国中科院科学家经过不懈努力，从野生玉米中成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP9，克隆出来并将此高蛋白基因转移到玉米细胞内，获得了转基因高蛋白玉米新品种。构建基因表达载体时，若科研人员需将THP9基囚整合到质粒上（如图）。回答下列问题：
EcoR I
BamH I
Kpn I
Mfe I
Hind III
1. （1）扩增优良基因THP9使用技术，依据的原理是，扩增时，需在耐高温的DNA聚合酶催化下，在引物端进行DNA链的延伸。
3. （2）构建基因表达载体时，为获得能正确表达THP9基因的重组质粒，具体操作是。
5. （3）采用农杆菌转化法将优良基因THP9导入玉米细胞中，在含氨苄青霉素的培养基上培养获得的菌落不一定含有重组质粒，原因是。
  将新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共同培养，筛选转化细胞并培育成转基因植株。欲从个体水平检测转基因玉米是否培育成功，实验方法是。
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1. (2024高二下·南海月考) 2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题：
1. （1）获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过过程获得cDNA（互补DNA），然后借助特异性引物进行扩增，PCR体外扩增的原理是，其中PCR需要酶。
3. （2）图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用一种限制酶；方案二：选用两种限制酶；方案二优于方案一的原因是。
5. （3）若将重组质粒导入大肠杆菌，需要用一定浓度的（离子）处理大肠杆菌，使细胞处于能吸收周围DNA分子的生理状态；若将重组质粒导入双子叶植物细胞和裸子植物，则最常用的方法是。
7. （4）筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入，培养一段时间后，挑选出色的菌落进一步培养获得大量目的菌。若想在分子水平上检测目的基因是否翻译为蛋白质，则通常采用方法。
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1. (2024高三下·云安月考) 番茄在种植过程中容易发生虫害。研究人员将双价抗虫载体转入番茄中，获得具有抗虫特性的转基因番茄。图为所用载体的部分结构示意图，其中Bar为除草剂抗性基因，Cry1Ac为苏云金杆菌毒蛋白基因，Pta为半夏凝集素基因。
回答下列问题：
1. （1）双价抗虫载体中的P₁、P₂和P₃是属于基因表达载体中的，其作用是。
3. （2）构建的载体通常用法转入到番茄子叶中并进行植物组织培养，并在培养基中添加用于筛选转基因番茄。
5. （3）为验证Pta基因是否转入番茄基因组中，研究人员使用技术筛选转基因番茄中的Pta基因，再进行凝胶电泳鉴定，结果如图所示。
  图中①为阳性对照，②为阴性对照，③为待测植株，试分析③中出现2条条带的可能原因是。
7. （4）对于成功转化的番茄植株还需进一步进行抗虫鉴定，研究人员选取3株阳性转基因番茄进行小菜蛾幼虫抗性实验，结果如下表。
  株系编号
  CK
  1
  2
  3
  幼虫致死率（%）
  0
  39.8
  6.5
  48.9
  注：CK表示对照
  由表中可知，株系2的幼虫致死率较低，推测其可能原因是。
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1. (2024高三上·扬州期末) 人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，由a链和β链（hCGβ）结合而成。近年研究显示，hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞，与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题：
注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
1. （1）图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是。
3. （2）当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替将目的基因导入基因表达载体的方法。
5. （3）阶段Ⅱ将环化质粒导入用处理的大肠杆菌，然后在含有的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
7. （4）为了检验重组质粒是否构建成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物进行PCR扩增，则最好选择图2中的引物。PCR反应体系中需加入模板、、、引物、Mg²⁺、缓冲液等，再将扩增产物进行来确定可用于导入酵母菌的重组质粒。
9. （5）阶段IV需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分（a．氨苄青霉素b．组氨酸c．无机盐d．琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，用进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。
11. （6）从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是。
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1. (2024高三下·平江开学考) 某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，交配以期获得Gata3-GFP基因纯合子小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，设计了引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。

下列叙述正确的是（　　）

A . Gata3基因的启动子无法控制GFP基因的表达 B . 翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 C . 2号条带的小鼠是野生型，4号条带的小鼠是Gata3-GFP基因纯合子 D . 若用引物1和引物3进行PCR，能更好地区分杂合子和纯合子

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1. (2024高三下·武汉开学考) 梨是我国原产果树之一，栽培历史悠久。梨清脆爽口，在市场上的需求较大，具有极强的经济价值、营养价值和药用价值，但梨采摘后在常温下容易腐烂，严重影响生产发展。某实验小组欲对梨的主要致腐菌进行分离鉴定，请回答下列问题：
1. （1）梨致腐微生物菌株分离与纯化
  实验小组采用平板划线法分离主要致腐菌并培养后，其中某个平板的第一划线区域长满了菌落，而其他区域均无菌落，原因可能是接种环灼烧后未冷却，还可能是。
3. （2）各致腐菌回接梨实验将不同的致腐菌依次制成菌液，将其分别回接到生长状况及大小均相同的新鲜无腐烂梨上，同时以为对照组，晾干后置于室温条件下储藏，每隔3d进行观察和记录，最终选取致腐能力强的致腐菌，并培养成菌落。
5. （3）致腐菌鉴定
  实验小组对筛选得到的致腐菌从菌落特征如（答出2点）等方面进行初步鉴定，再利用分子生物学、生物信息学等分析方法进行鉴定后，发现主要致腐菌中的一类是扩展青霉。
7. （4）生产实践中的快速检验
  在生产实践中，可通过PCR反应快速检测梨中的扩展青霉以达到防治梨腐烂的目的。在检测过程中，要根据扩展青霉特殊基因两端的碱基序列设计引物，如图为扩展青霉特殊基因的结构示意图，与之对应的引物结合的部位是（用图中数字作答）。若已知该基因的引物Ⅰ，能否依据其碱基序列设计出另一种引物Ⅱ？，理由是。
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1. (2024高三下·茂名月考) 在细菌和病毒类疾病检测、遗传疾病诊断、肿瘤筛查和诊断中，都可采用PCR技术。PCR反应由变性→复性→延伸三个基本反应步骤构成，PCR完成以后常需要鉴定PCR的产物。下列叙述正确的是（）

A . 变性：耐高温的DNA聚合酶将双链DNA解链为单链 B . 复性：两种引物与两条单链DNA结合不必控制温度 C . 延伸：4种脱氧核苷酸加到引物的5端 D . 鉴定：DNA 聚合酶质量不好可能导致鉴定结果不仅有一条带

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