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1. (2024高二下·南湖月考) 科学家将HPV16（人乳头瘤病毒）Ll基因导入烟草，利用转基因烟草作为生物反应器，生产出纯度较高的HPV16的L1蛋白。请回答：
1. （1）获得转基因烟草的核心是，该过程用两种酶进行酶切的优点是。
3. （2）可利用农杆菌侵染切割的烟草叶片，切割的目的是。
5. （3）与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织，并进一步分化形成，最终形成根。
7. （4）经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。也可以用法检测再生植株是否表达出相应的L1蛋白。
9. （5）利用转基因烟草植株生产的L1蛋白在医学或生物工程领域的用途：。（写出1项即可）
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1. (2024高二下·南湖月考) “筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列叙述正确的是（　　）

A . 基因工程中通过标记基因筛选出的细胞一定都含有重组质粒 B . 在诱变育种中需要通过筛选才能得到数量较多的有利变异 C . 植物体细胞杂交过程中，原生质体融合后获得的杂种细胞需进行筛选 D . 单克隆抗体制备过程中对杂交瘤细胞进行一次抗体检验即可大量获得阳性细胞克隆

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1. (2024高二下·南湖月考) 下列有关基因工程基本操作程序的叙述，正确的是（）

A . 目的基因检测时所用的核酸探针是指与目的基因相同的特定双链DNA B . 基因组文库的基因含有某物种的部分基因 C . 若基因比较小且核苷酸序列已知，则可直接通过化学方法合成 D . 抗生素合成基因作为标记基因，可鉴别目的基因是否导入受体细胞

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1. (2024高二下·东莞月考) 如图表示构建重组质粒和筛选含人胰岛素原基因的细菌的过程，其中I和II表示抗性基因，①—⑦表示过程，其它数字表示菌落。下列有关叙述正确的是（）
（注：⑦过程表示用灭菌绒布从含氨苄青霉素培养基中蘸取菌种，再按到含四环素培养基中培养）

A . ①②只能用同一种限制性核酸内切酶进行切割 B . I表示抗氨苄青霉素基因，II表示抗四环素基因 C . 3、5菌落是筛选出的含有人胰岛素原基因的细菌 D . 该基因工程成功的标志是细菌合成具有生物活性的胰岛素

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1. (2024高二下·常平期中) 炎症性肠病（IBD）是一种易导致结肠癌的慢性疾病，患者肠道内会产生硫代硫酸盐。科研人员以小鼠为研究对象，建立了下图所示的炎症性肠病检测模型，GFP基因是绿色荧光蛋白基因。
1. （1）据图分析，可以通过检测荧光强弱来判定小鼠肠道内硫代硫酸盐的浓度，其原因是。
3. （2）研究者利用基因工程技术构建含硫代硫酸盐检测传感器的大肠杆菌工程菌，通过PCR扩增R基因时应该选择的引物是，在A、B两端引物的5^'端需添加的限制酶识别序列为和。
  限制酶识别序列和酶切位点如下表：
  限制酶
  HindⅢ
  BamHⅠ
  PstⅠ
  EcoRⅠ
  BglⅡ
  识别序列（5^'→3^'）
  A↓AGCTT
  G↓GATCC
  C↓TGCAG
  G↓AATTC
  A↓GATCT
5. （3）研究发现患者肠道内硫代硫酸盐的生成量与疾病严重程度呈正相关。为简化疾病诊断和精确用药，科研人员开发了智能工程菌。科研人员将抗炎蛋白基因与硫代硫酸盐特异性诱导激活的启动子P连接，构建出下图所示表达载体（部分片段），导入用处理的大肠杆菌细胞内，选用启动子P的优点是。
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1. (2024高二下·惠城期中) 菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜而影响植物生长。某科研团队获得了转GNA基因（表达产物能有效抑制桃蚜生长）菊花，流程如图所示。下列相关叙述错误的是（）

A . 过程a、b分别表示逆转录和 PCR，可获得大量 GNA基因 B . 图中用到的Ti质粒是取自土壤中农杆菌的一种天然质粒 C . 图中c过程需要将GNA基因插入到 Ti质粒的T-DNA中 D . 通过桃蚜接种实验可以检测图中菊花植株对桃蚜的抗性

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1. (2024高二下·信宜期中) 2023年6月，云开山国家级自然保护区和华南农业大学按照紫荆木的生境，选择在云开山保护区的适生区域进行了22株人工培育实生苗的野外回归前期实验。为探究紫荆木原生质体的培养条件和植株再生能力，某研究小组进行了如下图的实验探究：
1. （1）植物细胞壁的主要成分为，在获取悬浮原生质体时，常采用相应的酶进行去壁处理。
3. （2） ①过程去壁处理前，要对外植体处理后才可接种培养；②过程称为，在该过程中所用到的关键植物激素有。
5. （3） LEA蛋白在植物遭受如盐害等胁迫时可起到很大的保护作用，某研究团队将耐盐酵母LEA蛋白基因NLEAs作为目的基因构建基因表达载体导人紫荆木培育转耐盐基因紫荆植株。将NLEAs基因导人紫荆细胞，常采用法，获得含NLEAs基因的紫荆组织细胞后，可通过技术，得到转基因紫荆幼苗。如何鉴定转耐盐基因紫荆植株是否培育成功？。
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1. (2024高二下·信宜期中) 研究人员将一种抗逆基因整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染拟南芥细胞，获得了不同株系的拟南芥。下列相关表述正确的是（）

A . 构建含有抗逆基因的Ti质粒需要限制酶、DNA聚合酶 B . 将抗逆蛋白基因整合到Ti质粒上就是构建基因表达载体 C . Ti质粒标记基因中腺嘌呤和尿嘧啶的含量相等 D . 只要检测出拟南芥细胞中含有抗逆基因，就代表抗逆拟南芥培育成功

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1. (2024高二下·信宜期中) 同尾限制酶简称同尾酶，指一类限制性核酸内切酶，它们的来源不同，能够对DNA切割产生相同的黏性末端，而其识别序列的特异性不同。下表中，属于同尾酶的组合是（）
限制酶名称
识别序列和切割位点
限制酶名称
识别序列和切割位点
BamH I
G↓ GATCC
Kpn I
GGTAC↓ C
EcoR I
G↓ AATTC
Sau3A I
↓GATC
Hind II
GTY↓RAC
Sma I
CCCT↓GGG
（注：Y=C或T；R=A或G ）

A . BamH I和Sau3A I B . EcoR I和Kpn I C . Sau3A I和Sma I D . Hind II和Sma I

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1. (2024高二下·联合月考) 酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母的絮凝能力，有助于发酵后细胞和产物的分离，节约生产成本。科研人员为研究R基因对酵母菌絮凝性能的影响，用基因工程技术获得了R基因被敲除的酵母菌菌株，主要步骤如图(G418为一种氨基糖苷类抗生素)。请据图回答下列问题。
1. （1）过程①采用PCR技术获取R基因左右两端的N片段和C片段，除了图中条件外，还需提供的是4种脱氧核苷酸、和含Mg²⁺的缓冲溶液。若引物2和引物4分别添加了Mlu I(限制酶)的识别序列，则引物1和引物3的5^'端分别添加的识别序列。
3. （2）过程③中用法将构建的重组质粒导入酵母菌，再利用含的培养基筛选出重组酵母，再挑取单菌落进行PCR扩增，验证酵母细胞R基因是否被敲除，则扩增时选择引物组合是。
5. （3）科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中，一定条件下静置发酵7天，测定酒精发酵能力和絮凝能力，结果如表。
  指标种类
  酒精发酵能力
  絮凝能力
  野生酵母菌
  4.5%
  63.1%
  R基因敲除酵母菌
  4.5%
  83.1%
  ①酒精发酵期间，每个锥形瓶应注意保持条件和定期排气。
  ②实验结果表明，请判断R基因敲除酵母菌是否符合生产需求并说出你的判断依据：。
7. （4）科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白(细胞壁抑制剂，破坏细胞壁的正常组装)的YPD培养基上，结果如图。推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是。
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限制酶	HindⅢ	BamHⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	BglⅡ
识别序列（5^'→3^'）	A↓AGCTT	G↓GATCC	C↓TGCAG	G↓AATTC	A↓GATCT

限制酶名称	识别序列和切割位点	限制酶名称	识别序列和切割位点
BamH I	G↓ GATCC	Kpn I	GGTAC↓ C
EcoR I	G↓ AATTC	Sau3A I	↓GATC
Hind II	GTY↓RAC	Sma I	CCCT↓GGG

指标种类	酒精发酵能力	絮凝能力
野生酵母菌	4.5%	63.1%
R基因敲除酵母菌	4.5%	83.1%