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1. (2023高三上·绍兴月考) 人促红细胞生成素（EPO）是一种可用于治疗肾性贫血的糖蛋白类激素，可用乳腺生物反应器生产 EPO。为了避免外源 EPO 基因随机整合到染色体 DNA 上，科研人员设计和构建了大鼠染色体定位整合克隆载体，利用大鼠乳清酸蛋白（WAP）基因上游的调控序列及启动子和 3′UTR 序列构建了基因表达载体。构建前，科研人员扩增了 WAP 基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入 EPO 基因中，以确定 WAP 基因启动子的具体位置，相关信息如图所示。
1. （1）在扩增 WAP 基因上游不同长度的片段时，PCR 反应体系中通常都应该含有酶、dNTP、Mg2+、缓冲剂系等。在反应过程中，反应体系中加入 dNTP 的作用是为扩增提供。
3. （2）为将扩增后的产物定向插入到基因表达载体中，以指导 EPO 基因的表达，需要在引物末端添加特定的限制酶识别序列。由图中信息可知，在 P1～P4 末端添加的序列所对应的限制酶是，在 A 末端添加的序列所对应的限制酶是。
5. （3）将 PCR 后得到的含不同长度的 WAP 基因上游序列与 EPO 基因连接，构建成基因表达载体，这一过程共需要种酶参与。检测转基因雌性大鼠时发现，导入含 P1～P3 与A扩增产物的个体乳汁中有 EPO，而含 P4 与 A 扩增产物的个体没有 EPO 生成。含 P4 与A扩增产物的个体没有 EPO 生成的原因是。
7. （4）该实验中，在 EPO 基因上游插入大鼠 WAP 基因启动子的理由是。
9. （5）科研人员不选用大肠杆菌作为该实验的受体细胞，从基因表达的角度分析，其原因是。
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1. (2023高二上·重庆市月考) 新冠病毒（SARS-CoV-2）引起的疫情在一些国家和地区肆虐，接种疫苗是控制全球疫情的最有效手段。新冠病毒疫苗有多种，其中我国科学家已研发出的腺病毒载体重组新冠病毒疫苗（重组疫苗）是一种基因工程疫苗，其基本制备步骤是：将新冠病毒的S基因连接到位于载体上的腺病毒基因组DNA中，重组载体经扩增后转入特定动物细胞，进而获得重组腺病毒并制成疫苗。关于该重组疫苗，下列叙述错误的是（）

A . 在重组疫苗制备时，需要逆转录酶参与 B . 重组疫苗只需注射一针即可完成接种 C . 重组疫苗可指导合成新冠病毒的多种蛋白质，以发挥更好的免疫效果 D . 为保证安全性，制备重组疫苗时需删除腺病毒的某些增殖相关的基因

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1. (2023·宁波模拟) 科研人员将目的基因J与质粒构建重组表达载体，该质粒的部分结构如图所示，下列叙述错误的是（）

A . 除图中标出的结构外，质粒还需具备的结构有复制原点、标记基因、限制酶切位点等 B . 与图中启动子结合的酶是RNA聚合酶 C . 用PCR检测J基因连接到质粒中且方向正确可选用的一对引物是F₁和R₂ D . 若J基因转录的链位于b链，可知引物F₁与基因J的b链相应部分序列相同

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1. (2023高三上·北京市期中) 马铃薯是世界上最重要的粮食作物之一，与大多数粮食作物不同，马铃薯主要以块茎繁殖。
1. （1）野生马铃薯为二倍体，而商业化的马铃薯栽培品种为四倍体，即体细胞中有4个。块茎繁殖易携带病原体，且四倍体的染色体高度杂合，使引入新性状的育种工作复杂化。因此，利用二倍体杂交是马铃普育种的发展趋势。
3. （2）大多数二倍体马铃薯自交不亲和，其受1号染色体上复等位基因（S₁ ， S₂ ， S₃……）控制。如下图所示，该基因在雌蕊的花柱中编码S酶，能抑制花粉管的伸长，导致精子不能与卵细胞结合；在雄蕊的花粉中则编码F蛋白，能识别降解进入花粉管的S酶，但对相同基因编码的S酶无效。
  图中的两个亲本杂交，后代的基因型及比例是。
5. （3）科学家发现一种自交亲和的二倍体马铃薯RH，研究发现其自交亲和由12号染色体上的A基因决定，A蛋白能识别绝大多数类型的S酶。将RH（父本，AaS₁S₁）与自交不亲和的二倍体PI（母本，aaS₂S₂）杂交，流程如图。
  ①F₁中SC自交，F₂中：AA：Aa=1：1，无aa类型的个体，理由是基因型为的精子花粉管不能伸长，无法完成受精。
  ②写出F₁中SC自交的遗传图解。
7. （4） S酶是雌蕊阻断花粉管萌发的“锁”，RH中的A蛋白则表现出“万能钥匙”的作用，从而打破自交不亲和性，对培育马铃薯自交系有重要作用。请写出利用RH培育出自交亲和的PI的流程。（用文字或图示作答均可）
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1. (2023高三上·和平月考) 表观遗传调节异常是肿瘤发生发展的重要因素之一，N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物mRNA上最常见的一种修饰。研究发现，胃癌细胞中存在m6A去甲基化酶（ALKBH5）过表达和STC2（癌症相关基因）mRNA的m6A修饰水平降低的异常现象。科研人员利用基因工程技术实现ALKBH5基因沉默和STC2基因的过表达，以研究ALKBH5介导的m6A甲基化修饰对胃癌细胞迁移的影响。
注：A、B、C、D为四种引物序列；BamHⅠ、HindⅢ、SacⅠ为限制酶
1. （1）已知STC2基因的α链为转录的模板链，据图1分析，利用PCR扩增目的基因时，需要在引物的5'端添加BamHI识别序列和强启动子序列，在引物的5'端添加SacI识别序列。
3. （2）为确保目的基因正确插入质粒，需要选择限制酶切割质粒。将重组质粒导入大肠杆菌体时，可利用潮霉素和卡那霉素筛选出导入重组质粒的大肠杆菌，试简要表述筛选思路：。
5. （3）研究人员分别用不同方式处理胃癌细胞，并测得胃癌细胞迁移标志蛋白含量如下：
  根据结果推测ALKBH5基因影响胃癌迁移的机理是。
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1. (2023高三上·和平月考) 由新型冠状病毒引起的新型冠状病毒肺炎正在世界蔓延。人们期盼通过安全有效的新冠疫苗来遏制这场大流行。下表为三种新冠病毒疫苗的研发方法及技术路线：

方法	技术路线
基因工程疫苗	S蛋白基因→基因表达载体→大肠杆菌→S蛋白→人体
腺病毒载体重组疫苗	S蛋白基因→腺病毒基因表达载体→人体
mRNA疫苗	S蛋白基因→基因表达载体→大肠杆菌→mRNA→人体

回答下列问题：

（1）在制备疫苗的过程中，常采用技术获取和扩增新冠病毒的S蛋白基因，扩增时，除了模板、四种脱氧核苷酸，还需要加入和引物。当该过程消耗了62个引物时，则进行了轮DNA复制。
（2）基因工程疫苗研制过程中，常用大肠杆菌作为受体细胞的原因是。若目的基因进入受体细胞稳定存在并表达，则说明目的基因完成了转化，从分子水平的角度可用进行检测。
（3）腺病毒载体疫苗是将S蛋白基因重组到改造后的腺病毒内，改造后的腺病毒载体应具备的条件是。（写出两点）
（4）以S蛋白作为抗原制备单克隆抗体用于治疗，单克隆抗体制备过程中需要对培养细胞进行筛选，第一次筛选的目的是得到杂交瘤细胞，该细胞的特点是。
（5）有人说“新冠病毒是RNA病毒，易发生变异，病毒变异后现用新冠疫苗便失去其功能”，请依据免疫学原理进行评价：。

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1. (2023高三上·长沙月考) 养殖家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加于饲料中，以提高家禽养殖效率。回答下列问题。
1. （1）乳酸杆菌是动物胃肠道的优势细菌之一，培养乳酸杆菌时培养基中除添加主要营养物质外还需要添加以满足其生长对特殊营养物质的需求。农牧业上常将以制糖工业的废液为原料通过发酵获得的制成微生物饲料提高饲料的品质。
3. （2）枯草芽孢杆菌分泌可降解纤维素的一种酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒为载体。图2为克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙链为转录模板链。
  ①很多启动子具有物种特异性，在图1质粒中插入W基因，其上游启动子应选择（填写字母）。
  A.枯草芽孢杆菌启动子
  B.乳酸杆菌启动子
  C.农杆菌启动子
  ②下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。
  限制酶
  EcoRⅠ
  BamHⅠ
  KpmⅠ
  MfeⅠ
  HindⅡ
  识别位点
  根据上述信息，应使用限制酶切割图1中质粒，使用限制酶切割图2中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。
5. （3）为确定导人重组质粒的乳酸杆菌是否具有分解纤维素的能力，研究人员将导入了重组质粒的乳酸杆菌接种在刚果红固体鉴定培养基上，若出现现象，则证明导人成功。
7. （4）解决谷物中纤维素难以被消化吸收的另一思路是将W基因转入家禽中，使转基因家禽消化道特异表达能够降解纤维素的酶。与该思路相比，上述利用转基因技术改造乳酸杆菌的方法有哪些优点？(写出1点即可)。
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1. (2023高三上·南京月考) 研究人员制备一种膀胱生物反应器，用其制备获得人体特殊功能蛋白A的基本过程如下图所示。下列叙述正确的是（）

A . 步骤①和②所代表的操作分别是显微注射、体外受精 B . 诱导雌性动物超数排卵所饲喂的激素能作用于特定细胞 C . 从卵巢采集的卵子通常需要培养成熟后与获能的精子进行体外受精 D . 早期胚胎培养过程中通常在培养液中通入5%的CO₂刺激细胞呼吸

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1. (2023高三上·渭南月考) “筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列关于筛选的叙述错误的是（）

A . 基因工程中利用标记基因筛选出的细胞不一定含重组质粒 B . 在诱变育种中需通过筛选才能得到数量较少的有利变异 C . 植物体细胞杂交过程中，原生质体融合后获得的细胞需进行筛选 D . 单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞

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1. (2023高三上·渭南月考) 下列有关基因工程的叙述，正确的是（）

A . DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 B . 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C . 质粒是常用的运载体，存在于许多细菌以及酵母菌等生物的细胞中，是能够自主复制的很小的链状DNA分子 D . 操作的步骤包括：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定

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