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1. (2023高二下·吉林期末) 枯草杆菌产生的蛋白酶M具有催化分解蛋白质的能力，但容易氧化失效。科学家将蛋白酶M的第222位氨基酸替换后获得的新蛋白酶M1的催化活性下降，但抗氧化能力显著提高。下列有关叙述错误的是（）

A . 改造蛋白酶M的技术属于蛋白质工程 B . 蛋白酶M和蛋白酶M1的氨基酸种类不同，但空间结构相同 C . 从蛋白酶M的抗氧化能力出发，设计蛋白酶M1的结构 D . 需要对控制蛋白酶M的基因的相应脱氧核苷酸序列进行改造

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1. (2023高二下·广州期末) 近年来，生物柴油作为新型能源已经成为世界上应用最广泛、发展迅猛的可再生能源之一。研究人员利用基因工程的方法将油料作物紫苏DGATI基因导入四尾栅藻（操作过程如图），获得转基因的产油微藻，并利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。

注：Lac2基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落则呈白色。

（1）提取紫苏细胞的总RNA经过得到的cDNA，经技术扩增得到DGAT1基因，与克隆质粒pMD19连接，将连接产物导入到经CaCl₂处理后的大肠杆菌细胞，并接种到添加的培养基上培养，一段时间后，挑选颜色为的菌落用液体培养基培养，提取质粒pMD19-DGAT1。
（2）用限制酶切pMD19-DGAT1获得DGAT1基因，并与酶切后的载体pBI121连接得到，并导入到四尾栅藻。
（3）转DGATI基因四尾栅藻成功的标志是__。研究人员利用地热废水培养转基因四尾栅藻并检测其油脂含量，结果如图2。

结果显示：。

（4）为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表2。

表2培养转基因四尾栅藻的地热废水各项指标总定结果

各项指标	总氮（mg/L）	总磷（mg/L）	氧化物（mg/L）
废水培养基	23.2	4.32	4.56
培养转基因四尾栅藻11天后	1.9	0.45	0.84

该实验不能说明转DGATI基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。请写出进一步完善实验设计的思路。

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1. (2023高二下·广州期末) 下列关于基因工程及其应用的叙述，错误的是（）

A . 花粉管通道法可以用微量注射器将含有目的基因的DNA溶液直接注入子房中 B . 只要从转基因棉花中检测到Bt抗虫蛋白，就代表转基因抗虫棉培育成功 C . Bt抗虫蛋白被分解为多肽后与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔 D . 干扰素是一种糖蛋白，科学家用基因工程方法从大肠杆菌细胞内获得了干扰素

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1. (2023·海南) 基因递送是植物遗传改良的重要技术之一，我国多个实验室合作开发了一种新型基因递送系统（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，简称CDB法）。图1与图2分别是利用常规转化法和CDB法在某植物中递送基因的示意图。

回答下列问题。
1. （1）图1中，从外植体转变成愈伤组织的过程属于；从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素有生长素和，该过程还需要光照，其作用是。
3. （2）图1中的愈伤组织，若不经过共培养环节，直接诱导培养得到的植株可以保持植株A的。图1中，含有外源基因的转化植株A若用于生产种子，其包装需标注。
5. （3）图1与图2中，农杆菌侵染植物细胞时，可将外源基因递送到植物细胞中的原因是。
7. （4）已知某酶（PDS）缺失会导致植株白化。某团队构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体（含有绿色荧光蛋白标记基因），利用图2中的CDB法将该重组载体导入植株B，长出毛状根，成功获得转化植株B．据此分析，从毛状根中获得阳性毛状根段的方法是，图2中，鉴定导入幼苗中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是，依据是。
9. （5）与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送的优点是（答出2点即可）。
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1. (2023·天津) 基因工程：制备新型酵母菌
1. （1）已知酵母菌不能吸收淀粉，若想使新型酵母菌可以直接利用淀粉发酵，则应导入多步分解淀粉所需的多种酶，推测这些酶生效的场所应该是（填“细胞内”和“细胞外”）
3. （2）同源切割是一种代替限制酶、DNA连接酶将目的基因导入基因表达载体的方法。当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。研究人员，运用同源切割的方式，在目的基因两端加上一组同源序列A、B，已知酵母菌体内DNA有许多A-B序列位点可以同源切割插入。构建完成的目的基因结构如图，则应选择图中的引物对目的基因进行PCR。
5. （3）已知酵母菌不能合成尿嘧啶，因此尿嘧啶合成基因（UGA）常用作标记基因，又知尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质。
  （i）导入目的基因的酵母菌应在的培养基上筛选培养。由于需要导入多种酶基因，需要多次筛选，因此在导入一种目的基因后，要切除UGA基因，再重新导大。研究人员在UGA基因序列两端加上酵母菌DNA中不存在的同源C．C'序列，以便对UGA基因进行切除。C．C'的序列方向将影响切割时同源序列的配对方式，进而决定DNA片段在切割后是否可以顺利重连，如图，则应选择方式进行连接。
  
  （ii）切去UGA基因的酵母菌应在的培养基上筛选培养。
7. （4）综上，目的基因、标记基因和同源序列在导入酵母菌的基因表达载体上的排列方式应该如图。
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1. (2023·天津) 根据下图，正确的是（）

A . 子代动物遗传性状和受体动物完全一致 B . 过程1需要MII期去核卵母细胞 C . 过程2可以大幅改良动物性状 D . 过程2为过程3提供了量产方式，过程3为过程1、2提供了改良性状的方式

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1. (2023高二下·宣城期末) 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中有内含子的基因A可以在肝脏中表达出特定蛋白A。现用基因工程技术生产蛋白A，下列操作正确的是（）

A . 可以从肝脏中提取人的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因A B . 也可以从人类基因组文库中获得基因A，再以大肠杆菌作为受体细胞 C . 若要以家蚕作为表达基因A的受体，可以用噬菌体构建基因表达载体 D . 若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可以用蛋白A的抗体作为检测物质

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1. (2023高二下·南岗期末) 种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变筛选到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，据此推测突变体的表型与其有关，开展相关实验。
回答下列问题：
1. （1）拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，若突变体表型确由该突变造成，则转基因植株的种子大小应与植株的种子大小相近。
3. （2）用PCR反应扩增DAI基因，用限制性核酸内切酶对PCR产物和进行切割，用DNA连接酶将两者连接。为确保插入的DAI基因可以正常表达，其上下游序列需具备。
5. （3）转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，并进一步获得目的基因稳定遗传的植株（如图），用于后续验证突变基因与表型的关系。
  ①农杆菌转化T₀代植株并自交，将T₁代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入      ▲      。
  ②T₁代阳性植株自交所得的T₂代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约      ▲      %的培养基中幼苗继续培养。
  ③将②中选出的T₂代阳性植株      ▲      （填“自交”、“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T₃代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到      ▲      %的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增野生型和突变型基因片段，再使用限制性核酸内切酶X切割产物，通过核酸电泳即可进行突变检测，相关信息见下。
  在电泳图中将酶切结果对应位置的条带涂黑。
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1. (2023高二下·南岗期末) a₁-胰蛋白酶缺乏症是北美常见的一种单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人a₁-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更容易获得这种酶。下列关于该过程的叙述中错误的是（）

A . 载体上绿色荧光蛋白基因（GFP）的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞 B . 将目的基因导入羊受精卵中，可以使用显微注射法 C . 培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因，故该羊有性生殖产生的后代也都能产生a₁-抗胰蛋白酶 D . 目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用

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1. (2023高二下·宝鸡期末) 研究人员用三种基因探针，对某转基因奶牛的乳腺细胞口腔上皮细胞、蹄部细胞中提取的mRNA进行分子杂交，结果如下表所示。下列叙述中错误的是（）

探针	乳腺细胞	口腔上皮细胞	蹄部细胞
乳腺蛋白基因探针	出现杂交带	未出现杂交带	未出现杂交带
人干扰素基因探针	出现杂交带	出现杂交带	出现杂交带
胰岛素基因探针	未出现杂交带	未出现杂交带	未出现杂交带

A . 人干扰素基因可在转基因奶牛的多种体细胞中表达 B . 可用mRNA逆转录产生的DNA制作相应基因的探针 C . 用上述探针分别检测三种细胞的DNA，都会出现杂交带 D . 胰岛A细胞中的mRNA能与胰岛素基因探针形成杂交带

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