1. 种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变筛选到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，据此推测突变体的表型与其有关，开展相关实验。

回答下列问题：

1. （1） 拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，若突变体表型确由该突变造成，则转基因植株的种子大小应与植株的种子大小相近。
3. （2） 用PCR反应扩增DAI基因，用限制性核酸内切酶对PCR产物和进行切割，用DNA连接酶将两者连接。为确保插入的DAI基因可以正常表达，其上下游序列需具备。
5. （3） 转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，并进一步获得目的基因稳定遗传的植株（如图），用于后续验证突变基因与表型的关系。

   

   ①农杆菌转化T₀代植株并自交，将T₁代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入      ▲      。

   ②T₁代阳性植株自交所得的T₂代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约      ▲      %的培养基中幼苗继续培养。

   ③将②中选出的T₂代阳性植株      ▲      （填“自交”、“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T₃代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到      ▲      %的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增野生型和突变型基因片段，再使用限制性核酸内切酶X切割产物，通过核酸电泳即可进行突变检测，相关信息见下。

   

   在电泳图中将酶切结果对应位置的条带涂黑。