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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 为提高培育转基因植株的成功率，所选择的植物受体需具有较强的再生能力和遗传稳定性。下列关于植物转基因受体的叙述错误的是（）

A . 对受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞内细胞核形态是否改变判断 B . 对受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过分析染色体组成是否改变进行判断 C . 受体细胞失去特有的形态和功能，进而形成愈伤组织，该过程属于再分化 D . 受体细胞变成完整植株，体现了受体细胞具有全能性

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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 由于某目的基因酶切后的末端为平末端，载体E只有产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P将目的基因接入载体E。据图分析，下列叙述正确的是（）

A . 通过PCR扩增获取目的基因是基因工程的核心工作 B . 为了便于该目的基因接入载体E，可用限制酶EcoR V或Sma I切割载体P C . 载体P不能作为基因表达载体，是因为其没有表达该目的基因的启动子与终止子 D . 若受体细胞表现出抗性基因的相应性状，表明重组载体成功导入受体细胞

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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 近年来，卒中、脑梗、心梗等心脑血管病患病率持续上升。2023年11月国家卫健委发布《心脑血管疾病防治行动实施方案》推进对患者的救治和防病工作。
1. （1）卒中、脑梗、心梗等心脑血管病多是因动脉粥样硬化、血栓引起组织缺血所致。血栓由纤维蛋白构成，组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）由527个氨基酸构成（如下图）， t-PA 进入血浆后激活纤溶酶原，使之转化成纤溶酶，酶将沉积在血管内壁的纤维蛋白分解血栓裂解，血管畅通。t-PA进入血浆后多与纤溶酶原激活剂抑制物形成复合物，很快失去活性，所以溶栓时要持续输入t-PA。然而，大剂量t-PA易诱发出血。鉴于此，有人提出通过抑制的活性，以延长t-PA的活性。进一步研究显示，t-PA第84位的半胱氨酸替换为丝氨酸后的t-PA溶血栓更快，这种改造的t-PA副作用更小。用生物化学手段直接改造“t-PA”蛋白质的结构，或是定点改造 t-PA 基因成为“突变基因”，通过基因工程等生物工程技术获取“突变的t-PA”。通过后者改造“t-PA”的主要优势是（写出一点）。
3. （2）已知t-PA基因碱基序列、丝氨酸密码子，可以通过人工合成目的基因（t-PA 突变基因）、基因与质粒重组构建表达载体、表达载体进入受体细胞等一系列操作，最终获取“突变的t-PA”。这种基于t-PA的分子结构和功能的关系，通过一系列DNA 分子层面的操作获取人类所需蛋白产品的第二代基因工程过程又叫做。
5. （3）从上述人t-PA 基因获得第84位半胱氨酸替换为丝氨酸编码序列的t-PA突变基因，常借助PCR体外定点定向诱变获得。工作原理如图：先合成包含突变碱基的两个突变引物。因突变点不位于基因端点，要借助 PCR 获得完整的t-PA 突变基因，还要合成两个正常引物1、2.参考图中正常引物1（5'-TACCAAGTGATCTGCAGA-3'）、t-PA 基因和 PCR 诱变过程原理图，正常引物2 是5’……-3’（写出5’端的6个碱基即可）
7. （4）为了与质粒高效连接，t-PA突变基因两端应携带相应的限制酶识别序列。应将限制酶识别序列设计在两条正常引物的端。限制酶能够使 DNA 分子中特定部位的键断开。
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1. (2024高三·贵阳模拟) 肿瘤细胞可以表达CD47蛋白，并与吞噬细胞表面的信号调节蛋白a（SIRPa）结合，向吞噬细胞发出“别吃我”的信号，以逃脱机体免疫系统的攻击。因此阻断CD47/SIRPa信号，有望恢复吞噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。请回答有关问题：
1. （1）利用外源DNA、质粒制备含CD47基因的重组质粒。如图为含CD47基因的外源DNA、质粒的有关信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均为限制酶，Kan'、Tc'分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。
  ①为了形成合适的重组质粒，应该选用BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切割外源DNA和质粒DNA，原因是：a、；b、。
  ②重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图所获得的重组质粒分析，所选受体细胞应具备条件。
3. （2）如图是利用上述基因工程获得的CD47蛋白制备相应单克隆抗体及相关治疗效果检测实验过程。
  ①图中获得细胞A的器官通常是。
  ②图中过程b可以采用的方法有。（答出一点）
  ③图中“筛选”一般需要进行两次，目的依次是：第一次，第二次。
  ④如图中共同培养吞噬细胞和肿瘤细胞，在实验组加入不同浓度的CD47抗体，测定吞噬细胞的吞噬指数（吞噬指数与吞噬细胞所吞噬的肿瘤细胞数量成正相关），实验结果如图所示。该实验结果对临床治疗肿瘤有何指导意义？。
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1. (2024高三下·黔西模拟) 科学家提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的方法：利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，利用工程菌获得胰岛素。回答下列问题：
1. （1）利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因需要酶。
3. （2）基因工程中的核心工作是，该过程需要的工具酶是。
5. （3）如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。
  在设计PCR引物时最好添加限制酶的识别序列，选择依据是。
  经GenBank检索后，得知胰岛素基因左端①处的碱基序列为—GCATTCTGAGGC—，则其中一种引物设计的序列是5'—3'。
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1. (2024高三下·关岭模拟) 科研人员构建了可表达GM-CSF（一种细胞因子）的重组质粒，以增加白细胞数量，通过基因工程技术大量生产GM-CSF，满足临床需求。M-CSF基因及相关限制酶的酶切位点如图所示。请回答下列问题。
1. （1）利用PCR技术扩增CM-CSF基因时，需要在引物上添加限制酶的识别序列，同时也便于与质粒正确连接。
3. （2）质粒和GM-CSF基因结合形成的重组质粒在受体细胞中能够稳定存在并发挥作用，在CM-CSF基因的首端必须具有，其作用是。
5. （3）筛选已导入GM-CSF基因的大肠杆菌时，先将大肠杆菌接种到含有抗生素的培养基中培养，从获得的菌落中取菌体接种到含有抗生素的培养基中，若（填“有菌落生长”或“无菌落生长”），则获得的培养物符合要求。
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1. (2024·贵州模拟) 干扰素是一种具有干扰病毒复制作用的糖蛋白，在临床上被广泛用于治疗病毒感染性疾病。1993年，我国批准生产重组人干扰素α—1b，它是我国批准生产的第一个基因工程药物，目前主要用于治疗慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎。请回答下列问题：
1. （1）干扰素属于免疫活性物质，免疫活性物质是指。
3. （2）利用基因工程将干扰素基因导入大肠杆菌，可获得产生干扰素的工程菌。基因表达载体构建是基因工程的重要一环。质粒是一种常用于基因表达载体构建的运载体，构建重组质粒需要的工具酶有，重组质粒中标记基因的作用是。
5. （3）科学家通过发酵工程大量培养具有干扰素生产能力的大肠杆菌细胞，从而生产大量的干扰素，在发酵过程中，除需观测发酵条件外，还要随时检测培养液中的、等，以了解发酵进程。
7. （4）干扰素在体外保存相当困难，如果将干扰素分子中的第十七位氨基酸由半胱氨酸变为丝氨酸，则在—70℃的条件下，干扰素可以保存半年。请你据此事实，阐述利用蛋白质工程技术获得上述耐保存的干扰素的基本思路：。
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1. (2024·贵州模拟) 由C基因编码的C蛋白和V基因编码的V蛋白均能特异性杀死玉米害虫，这两种蛋白的结构和作用原理不同。现利用C—V融合基因和如图所示载体，获得具高抗虫性的转基因玉米。下列有关叙述错误的是（）

A . 构建含有C—V融合基因的载体需要限制酶和DNA连接酶 B . 载体中的目的基因可以通过农杆菌的转化进入玉米细胞 C . 在玉米细胞染色体DNA上检出C—V基因就说明培育成功 D . 以单转C基因玉米为食比以该玉米为食的害虫更易产生抗性

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1. (2024·贵州模拟) 在植物基因工程中外源基因表达量不足是目前利用转基因植物生产植物疫苗时存在的问题之一。研究表明，启动子的串联能增强外源基因的表达，研究人员拟构建含有两个35s启动子（35s启动子是花椰菜花叶病毒的一种强启动子）串联的转基因苜蓿。一个35s启动子包括1个A区和2个B区。图甲表示35s启动子及其附近区域分布的限制酶识别位点，已知不同限制酶切割后得到的黏性末端各不相同。图乙表示待转入第二个35s启动子的重组质粒的构成组件及其上的限制酶识别位点。
1. （1）利用PCR技术可以扩增35s启动子，PCR技术的原理是，此技术设计引物很关键，引物是。利用此技术扩增的35s启动子可以在PCR扩增仪中自动完成，完成以后，常采用来鉴定PCR的产物。
3. （2）根据限制酶识别位点，为了让第二个35s启动子准确串联在待转入的重组质粒上，应选择限制酶切割图甲的DNA片段。
5. （3）为了筛选出正确串联了两个35s启动子的新重组质粒菌落，研究人员用含有不同抗生素的平板进行筛选，平板类型丙和丁加入的抗生素分别是、，得到①②③三类菌落，其生长状况如下表（+代表生长，-表示不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是（填“①”“②”或“③”）类。若新获得的转基因苜蓿中目的基因的表达量大幅增加，可以说明串联两个35s启动子能。
  平板类型
  ①
  ②
  ③
  甲：无抗生素
  +
  +
  +
  乙：卡那霉素
  -
  -
  +
  丙：？
  -
  +
  +
  丁：？
  -
  -
  +
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1. (2024高三下·韶关模拟) I结球甘蓝（雌雄同株）又称卷心菜，是老百姓菜篮子里四季常见、质优价廉的蔬菜。开展与之有关的遗传与育种研究，具有十分重要的意义。请回答下列问题结球甘蓝的叶色有紫色和绿色两种，由两对独立遗传的等位基因（D/d和E/e）控制。现将两种纯合的紫色叶结球甘蓝分别与绿色叶结球甘蓝杂交，并设为甲、乙两组；两组F₁叶色均为紫色，将两组F₁分别自交，甲组所得F₂中紫色叶植株与绿色叶植株的比例为15∶1，乙组所得F₂中紫色叶植株与绿色叶植株的比例为3∶1.由题意可知，甲组F₂紫色叶植株中杂合子基因型的种类有种；乙组亲本紫色叶植株的基因型为；若让乙组F₂紫色叶植株自由交配，所得子代表现型及比例为。
II.研究发现，P5CS基因能促进脯氨酸的大量合成进而提高植物耐盐碱能力。某研究小组利用基因工程等技术将从野生茄子中获得的P5CS基因（简称StP5CS基因）导入到结球甘蓝细胞中，培育出了耐盐碱的结球甘蓝转基因新品种（实验流程图如图所示）。
①根据上图可知，Bar基因的作用是；若Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ为5种限制酶及其酶切位点，为使StP5CS基因最终能正确表达，过程①应选用（填符号）进行酶切；耐盐碱的结球甘蓝转基因植株细胞是以StP5CS基因的（选填“a链”或“b链”）为模板进行转录，并最终使植株表现出耐盐碱性状。
②根据题意，请写出一种检测或鉴定所得植株为转基因耐盐碱结球甘蓝的方法。

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丙：？	-	+	+
丁：？	-	-	+