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1. (2024高二下·东莞月考) 半乳糖血症是单基因遗传病，科学家将正常基因D导入该病患者的细胞，以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因D的DNA片段，图丙为重组载体的示意图。Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，其表达产物可以将无色化合物X-gal转化成蓝色物质，使菌落呈蓝色，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。请回答：
1. （1）基因工程操作的核心步骤是。图甲中三种质粒适宜作为运载体的是质粒，与另外两种质粒相比，其作为载体的优点是。
3. （2）为了提高实验成功率，需要通过技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该技术原理为。
5. （3）获取目的基因D时应选择乙图中的对其所在的DNA进行切割。将目的基因D和甲图中相应质粒连接后，得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒，使用对质粒完全酶切后，进行电泳分析。若是正向连接载体，电泳图谱中出现长度为Kb和5.5 Kb两条带。
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1. (2024高二下·封开期中) 科学家创造了“基因敲除”技术：将外源基因整合到小鼠胚胎干细胞的DNA同源序列中，使某一个基因被取代或破坏而失活，然后将修饰后的胚胎干细胞植入小鼠的早期胚胎，形成嵌合体小鼠。科学家已经利用上述技术成功地把人类囊肿性纤维化病的致病基因移植到小鼠身上，培育出了患囊肿性纤维化病的小鼠。下列有关叙述错误的是（　　）

A . 通过上述“基因敲除”技术可以定向改变生物体的遗传性状 B . 在“基因敲除”中需要用到限制性内切核酸酶、DNA连接酶等 C . 这种嵌合体小鼠长大后，体内存在外源基因，但不会遗传给后代 D . “基因敲除”技术有利于人类对某些遗传因素引发的疾病进行研究

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1. (2024高二下·封开期中) 应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：
1. （1）在培育转人生长激素基因牛过程中，进行基因表达载体构建时，人生长激素基因的上游必须含有。①过程需要的工具酶是，③过程培养到桑葚胚或囊胚阶段，可以采用技术，培育出多头相同的转基因犊牛。
3. （2） prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是细胞，Ⅲ代表的细胞具有的特点。
5. （3）在抗虫棉培育过程中，⑤过程采用的技术是。
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1. (2024高二下·肇庆期中) 在基因工程中涉及到DNA的提取、目的基因的扩增及电泳鉴定，下列有关叙述正确的是（）

A . 利用DNA不溶于酒精、不能溶于2mol/L的NaCl溶液的性质，可进行DNA的粗提取 B . 待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 C . 在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下会逐渐产生砖红色沉淀 D . PCR过程中，耐高温的DNA聚合酶需先与启动子结合，继而从引物的3^'端延伸子链

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1. (2024高二下·肇庆期中) 从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌体和溶血性均较强的多肽P1。目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是（）

A . 合成编码目的肽的DNA片段 B . 构建含目的肽DNA片段的表达载体 C . 依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽 D . 筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽

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1. (2024高二下·佛山期中) 如图表示某质粒的结构示意图。下列叙述错误的是（　　）

A . 构建基因表达载体时目的基因插入在启动子和终止子之间 B . 由该质粒的限制酶识别位点可知，可选择EcoRI和HindⅢ切割质粒 C . 启动子能与RNA聚合酶结合，驱动相关基因转录出相应的mRNA D . 该质粒中标记基因的作用是便于重组DNA分子的筛选

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1. (2024高二下·常平期中) 新冠病毒通过表面刺突蛋白（S蛋白）的活性域（RBD）与人体细胞表面的ACE2受体相互作用感染细胞。科学家设计了一种自然界中不存在的蛋白质LCB1，可与S蛋白的RBD紧密结合，以干扰新冠病毒的感染。下列叙述不合理的是（）

A . 生产LCB1用到了基因工程的操作技术 B . 可直接从细胞中获取基因用于LCB1的生产 C . LCB1的结构可能与S蛋白的抗体有相似之处 D . S蛋白的RBD结构可以为设计LCB1提供信息

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1. (2024高二下·信宜期中) 研究人员将一种抗逆基因整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染拟南芥细胞，获得了不同株系的拟南芥。下列相关表述正确的是（）

A . 构建含有抗逆基因的Ti质粒需要限制酶、DNA聚合酶 B . 将抗逆蛋白基因整合到Ti质粒上就是构建基因表达载体 C . Ti质粒标记基因中腺嘌呤和尿嘧啶的含量相等 D . 只要检测出拟南芥细胞中含有抗逆基因，就代表抗逆拟南芥培育成功

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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 甲胺磷是一种广谱、高效、剧毒的有机磷杀虫剂，曾被长期大量使用，引起水体、土壤污染，严重破坏了环境生态平衡，同时危害到人畜健康。利用微生物降解甲胺磷农药是解决使用甲胺磷带来的环境污染的有效途径。回答下列问题：
1. （1）筛选获得甲胺磷降解菌：选择长期使用甲胺磷农药的农田的土壤为样品，将获得的样品用无菌水稀释后接种于添加了的选择培养基上进行培养，可以分离出能分泌甲胺磷降解酶的细菌。甲胺磷被降解后平板上会出现透明圈，应挑取的单菌落在选择性固体培养基上进行重复划线、分离和纯化。
3. （2）测定甲胺磷降解率：选择三种菌株对甲胺磷进行降解，降解情况如图所示，其中降解甲胺磷效果最好的菌株是，该菌株培养时间与甲胺磷降解率的关系为。
5. （3）构建降解甲胺磷工程菌：将提取和分离得到的甲胺磷降解酶进行氨基酸序列测定，根据得到的氨基酸序列推出，然后设计合成引物，通过技术扩增出甲胺磷降解酶基因。后经一系列过程，获得高表达的降解甲胺磷工程菌。
7. （4）转基因工程菌在自然界的扩散可能会带来生态风险。为此，科研人员利用以下材料，设计了可被诱导而自毁的甲胺磷工程菌。所需材料和结构有：
  ①质粒
  ②IPTG（一种模拟异乳糖的试剂，可去除lac启动子中的阻遏物以诱导基因表达）
  ③lac启动子
  ④核酸水解酶基因
  其具体设计思路是将（填序号）构建成重组载体，导入工程菌。需自毁时外源增加（填序号）进行诱导，引发甲胺磷工程菌自毁。
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1. (2024·揭阳模拟) CRISPR/Cas9基因编辑技术根据靶基因序列设计向导sgRNA，精确引导核酸酶Cas9切割与sgRNA配对的DNA，相关酶在修复断裂DNA的过程中会改变连接部位的碱基序列。科研人员通过删除编码PD-1蛋白基因的2、3、4片段造成蛋白质的功能缺失，制作PD-1基因敲除鼠的流程如图1所示。将体外转录获得的Cas9mRNA和sgRNA导入小鼠的受精卵中，获得了 12只基因编辑小鼠。利用PCR鉴定小鼠的基因型，电泳结果如图2所示。已知P1和P2是PCR 的引物。下列相关分析正确的是（　　）

A . 敲除2、3、4片段引起的变异属于基因重组 B . 敲除前，根据敲除的位置需要设计3个sgRNA C . 图2中，4和12个体杂交的子代均为敲除纯合子 D . 图2中，3、5、7个体的体内均能检测到PD-1

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