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高中生物学
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1. 半乳糖血症是单基因遗传病,科学家将正常基因D导入该病患者的细胞,以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒,图乙为含有目的基因D的DNA片段,图丙为重组载体的示意图。Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因,lacZ为蓝色显色基因,其表达产物可以将无色化合物X-gal转化成蓝色物质,使菌落呈蓝色,EcoRI(0.6Kb)、PvuI(0.8Kb)为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。请回答:
(1) 基因工程操作的核心步骤是
。图甲中三种质粒适宜作为运载体的是质粒
,与另外两种质粒相比,其作为载体的优点是
。
(2) 为了提高实验成功率,需要通过
技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝,该技术原理为
。
(3) 获取目的基因D时应选择乙图中的
对其所在的DNA进行切割。将目的基因D和甲图中相应质粒连接后,得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒,使用
对质粒完全酶切后,进行电泳分析。若是正向连接载体,电泳图谱中出现长度为
Kb和5.5 Kb两条带。