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1. (2024高三下·河池模拟) 某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因，研究者欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因（Amp^R）、LacZ基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如下图所示。回答下列问题：
1. （1）构建基因表达载体时，为了提高目的基因与载体的连接效率，最好用处理质粒和目的基因，目的基因之所以可以稳定存在及表达，是因为基因表达载体中有。
3. （2）将目的基因导入大肠杆菌前，需要用CaCl₂处理大肠杆菌，目的是。
5. （3） Amp^R和LacZ的作用是，取⑤中菌落为含有目的基因的菌落。
7. （4）从蛋白质加工角度看，与大肠杆菌相比，乳腺生物反应器生产胰岛素的优点是。
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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 新冠疫苗能有效预防新冠肺炎。目前中国已经上市的疫苗中有重组蛋白疫苗和重组腺病毒载体疫苗等。科研人员选择了SARS-CoV-2的S蛋白基因通过转基因技术制备了重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗（如图所示）。回答下列问题：
1. （1）据图1可得到含有多个限制酶切位点的S蛋白基因序列，若要在短时间内获得大量的S蛋白基因，可采取的方法是，该方法的实质是进行。该过程需要人工合成部分核苷酸片段，合成的该片段具有的特点是（答两点）。
3. （2）获得足够量的S蛋白基因后须构建基因表达载体，其目的是。如图2是相关的质粒，要保证S蛋白基因的正确表达，需选用和HindⅢ酶进行切割，且不破坏标记基因。
5. （3）重组腺病毒载体疫苗是把腺病毒中原有与复制相关的基因剔除，替换为新冠病毒S蛋白的基因。与重组蛋白疫苗相比，重组腺病毒载体疫苗对新冠肺炎的预防效果更好，从免疫的角度分析，原因是。
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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 近年来，卒中、脑梗、心梗等心脑血管病患病率持续上升。2023年11月国家卫健委发布《心脑血管疾病防治行动实施方案》推进对患者的救治和防病工作。
1. （1）卒中、脑梗、心梗等心脑血管病多是因动脉粥样硬化、血栓引起组织缺血所致。血栓由纤维蛋白构成，组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）由527个氨基酸构成（如下图）， t-PA 进入血浆后激活纤溶酶原，使之转化成纤溶酶，酶将沉积在血管内壁的纤维蛋白分解血栓裂解，血管畅通。t-PA进入血浆后多与纤溶酶原激活剂抑制物形成复合物，很快失去活性，所以溶栓时要持续输入t-PA。然而，大剂量t-PA易诱发出血。鉴于此，有人提出通过抑制的活性，以延长t-PA的活性。进一步研究显示，t-PA第84位的半胱氨酸替换为丝氨酸后的t-PA溶血栓更快，这种改造的t-PA副作用更小。用生物化学手段直接改造“t-PA”蛋白质的结构，或是定点改造 t-PA 基因成为“突变基因”，通过基因工程等生物工程技术获取“突变的t-PA”。通过后者改造“t-PA”的主要优势是（写出一点）。
3. （2）已知t-PA基因碱基序列、丝氨酸密码子，可以通过人工合成目的基因（t-PA 突变基因）、基因与质粒重组构建表达载体、表达载体进入受体细胞等一系列操作，最终获取“突变的t-PA”。这种基于t-PA的分子结构和功能的关系，通过一系列DNA 分子层面的操作获取人类所需蛋白产品的第二代基因工程过程又叫做。
5. （3）从上述人t-PA 基因获得第84位半胱氨酸替换为丝氨酸编码序列的t-PA突变基因，常借助PCR体外定点定向诱变获得。工作原理如图：先合成包含突变碱基的两个突变引物。因突变点不位于基因端点，要借助 PCR 获得完整的t-PA 突变基因，还要合成两个正常引物1、2.参考图中正常引物1（5'-TACCAAGTGATCTGCAGA-3'）、t-PA 基因和 PCR 诱变过程原理图，正常引物2 是5’……-3’（写出5’端的6个碱基即可）
7. （4）为了与质粒高效连接，t-PA突变基因两端应携带相应的限制酶识别序列。应将限制酶识别序列设计在两条正常引物的端。限制酶能够使 DNA 分子中特定部位的键断开。
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1. (2024高三下·韶关模拟) 研究人员发现梨果实中的PbA1蛋白可催化葡萄糖异构为果糖，进而提升果实甜度。下列相关叙述正确的是（　　）

A . PbA1蛋白可为相应化学反应提供活化能 B . PbA1蛋白可催化葡萄糖和果糖生成蔗糖 C . 斐林试剂可用于验证PbA1蛋白的催化作用 D . PbA1蛋白在工业上可用于生产高果糖糖浆

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1. (2024高三下·韶关模拟) 科学家利用蛋白质工程技术将水蛭素（一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质）第47位的天冬酰胺替换为赖氨酸，显著提高了它的抗凝血活性，流程图如下。已知天冬酰胺对应的密码子为AAU、AAC，赖氨酸对应的密码子为AAA、GUA等。下列叙述错误的是（　　）

A . 上图的操作流程是从预期的水蛭素功能出发的 B . 在这项替换研究中目前可行的直接操作对象是基因 C . 上图中大分子物质a和b的单体序列均是唯一的 D . 用蛋白质工程可生产基因工程所不能生产的蛋白质

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1. (2024高三·广东模拟) 利用农杆菌转化法将苏云金杆菌的Bt基因导入棉花细胞获得抗虫棉，可有效减少农药使用，提高棉花产量。下列相关叙述错误的是（　　）

A . 农杆菌转化法和肺炎链球菌转化实验的原理相同 B . 苏云金杆菌和棉花的基因都是有遗传效应的DNA片段 C . 农杆菌转化法一般需要农杆菌的Ti质粒作为表达载体 D . 由该种方法获得的转基因抗虫棉无法将抗虫基因遗传给子代

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1. (2024高三·广东模拟) 生物技术在迅猛发展，它与人类健康、生产生活的关系越来越密切。下列说法错误的是（）

A . 利用马铃薯茎尖组织培养获得的脱毒苗能提高产量 B . 单克隆抗体在疾病诊断和病原体鉴定中发挥重要作用 C . 通过乳房生物反应器可在分泌的乳汁中获得所需的药物 D . 蛋白质工程可对蛋白质结构直接改造以满足生产生活需求

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1. (2024高三·广东模拟) 健康的生活方式、乐观的心态和定期体检是预防癌症的主要手段。（CAR-T细胞疗法是治疗血液恶性肿瘤及淋巴瘤的研究热点，我国首款新型肿瘤治疗方法——CAR-T产品于2021年上市。左图为CAR-T细胞疗法的原理示意图，该疗法借助基因工程和细胞工程技术，根据CAR蛋白（右图）是多种肿瘤的嵌合抗原受体的特点而设计。
回答下列问题：
1. （1）机体肿瘤的发生主要与免疫系统的功能降低有关。
3. （2）图中过程①称为，这是基因工程的核心步骤，需要用到的工具酶有。过程②最常用的方法是。CAR-T细胞输入患者体内后，其活化需要两个信号的刺激，具体是。
5. （3）据图可知，CAR-T细胞疗法相对传统的药物化疗和放疗而言，具有（请写出两点）的突出优点。
7. （4） CAR-T细胞在治疗肺癌、肝癌、乳腺癌等实体瘤的总体效果上还不尽如人意，请根据右图并结合特异性免疫的原理，提出一种CAR蛋白改造的简单思路，以提升CAR-T细胞对实体瘤的疗效：。
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1. (2024高三下·威宁月考) 科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达，请回答：
1. （1）该研究除了证明质粒可以作为载体外，还证明了（答出一点即可）。
3. （2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的转化方法导入大肠杆菌细胞，而体外重组的噬菌体DNA通常需与组装成完整的噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、胚胎干细胞、根尖分生区细胞、酵母菌中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是。
5. （3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞里表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验室中应选用缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加的抑制剂。
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1. (2023高三上·常州期末) 下列关于生物技术安全性与伦理问题的叙述，正确的是（）

A . 我国对农业转基因生物实行标识制度，必须在标签上警示性注明可能危害 B . 生殖性克隆人能丰富人类基因的多样性，可在特定人群中进行相关实验 C . 可通过基因编辑技术对基因进行敲除、插入等，来设计完美试管婴儿 D . 针对转基因技术的应用，我国的方针是研究上要大胆，推广上要慎重

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