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1. (2024·新课标) 某研究小组将纤维素酶基因（N）插入某种细菌（B1）的基因组中，构建高效降解纤维素的菌株（B2）。该小组在含有N基因的质粒中插入B1基因组的M1与M2片段；再经限制酶切割获得含N基因的片段甲，片段甲两端分别为M1与M2；利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术将片段甲插入B1的基因组，得到菌株B2。酶切位点（Ⅰ～Ⅳ）、引物（P1～P4）的结合位置、片段甲替换区如图所示，→表示引物5^'→3^'方向。回答下列问题。
1. （1）限制酶切割的化学键是。为保证N基因能在菌株B2中表达，在构建片段甲时，应将M1与M2片段分别插入质粒的Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ酶切位点之间，原因是。
3. （2） CRISPR/Cas9技术可以切割细菌B1基因组中与向导RNA结合的DNA。向导RNA与B1基因组DNA互补配对可以形成的碱基对有G﹣C和。
5. （3）用引物P1和P2进行PCR可验证片段甲插入了细菌B1基因组，所用的模板是；若用该模板与引物P3和P4进行PCR，实验结果是。
7. （4）与秸秆焚烧相比，利用高效降解纤维素的细菌处理秸秆的优点是（答出2点即可）。
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1. (2024·新课标) 某种二倍体植物的P₁和P₂植株杂交得F₁ ， F₁自交得F₂ ，对个体的DNA进行PCR检测，产物的电泳结果如图所示，其中①～⑧为部分F₂个体，上部2条带是一对等位基因的扩增产物，下部2条带是另一对等位基因的扩增产物，这2对等位基因位于非同源染色体上。下列叙述错误的是（）

A . ①②个体均为杂合体，F₂中③所占的比例大于⑤ B . 还有一种F₂个体的PCR产物电泳结果有3条带 C . ③和⑦杂交子代的PCR产物电泳结果与②⑧电泳结果相 D . ①自交子代的PCR产物电泳结果与④电泳结果相同的占 $\text{[math]}$

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1. (2024·全国甲卷) [生物-选修3：现代生物科技专题]
某同学采用基因工程技术在大肠杆菌中表达蛋白E。回答下列问题。
1. （1）该同学利用PCR扩增目的基因。PCR的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段，其中DNA双链打开成为单链的阶段是，引物与模板DNA链碱基之间的化学键是。
3. （2）质粒载体上有限制酶a、b、c的酶切位点，限制酶的切割位点如图所示。构建重组质粒时，与用酶a单酶切相比，用酶a和酶b双酶切的优点体现在（答出两点即可）；使用酶c单酶切构建重组质粒时宜选用的连接酶。
5. （3）将重组质粒转入大肠杆菌前，通常先将受体细胞处理成感受态，感受态细胞的特点是；若要验证转化的大肠杆菌中含有重组质粒，简要的实验思路和预期结果是。
7. （4）蛋白E基因中的一段DNA编码序列（与模板链互补）是GGGCCCAAGCTGAGATGA，编码从GGG开始，部分密码子见表。若第一个核苷酸G缺失，则突变后相应肽链的序列是。
  氨基酸
  密码子
  赖氨酸
  AAG
  精氨酸
  AGA
  丝氨酸
  AGC
  脯氨酸
  CCA
  CCC
  亮氨酸
  CUG
  甘氨酸
  GGC
  GGG
  终止
  UGA
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1. (2024高二下·南湖月考) 科学家将HPV16（人乳头瘤病毒）Ll基因导入烟草，利用转基因烟草作为生物反应器，生产出纯度较高的HPV16的L1蛋白。请回答：
1. （1）获得转基因烟草的核心是，该过程用两种酶进行酶切的优点是。
3. （2）可利用农杆菌侵染切割的烟草叶片，切割的目的是。
5. （3）与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织，并进一步分化形成，最终形成根。
7. （4）经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。也可以用法检测再生植株是否表达出相应的L1蛋白。
9. （5）利用转基因烟草植株生产的L1蛋白在医学或生物工程领域的用途：。（写出1项即可）
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1. (2024高二下·南湖月考) 研究发现人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科学家培育出转人溶菌酶基因山羊，以大规模生产人溶菌酶(从乳汁中提取)，过程如图所示。其中编号①～⑨表示过程；质粒S中的基因Leu通过控制相关酶的合成而影响亮氨酸的合成(亮氨酸是山羊细胞维持生命活动必不可少的一种必需氨基酸)，基因GFP控制合成绿色荧光蛋白。四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。请回答下列问题：
限制酶
BamHⅠ
BglⅡ
HindⅢ
XbaⅠ
识别序列和切割位点
G^↓GATCC
A^↓GATCT
A^↓AGCTT
T^↓CTAGA
1. （1）过程①通过PCR技术扩增A，需要的酶是；过程②需要的限制酶是。
3. （2）为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞，质粒S中用作标记基因的是。为达到筛选目的，培养基的营养成分中应不含有。将成纤维细胞培养一段时间后观察，筛选出(填“显示”或“不显示”)绿色荧光的细胞用于过程⑤。
5. （3）过程④常用法，过程⑨为。
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1. (2024高二下·南湖月考) 实时荧光定量PCR可用于对样品中特定DNA序列进行定量分析。将荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混合，当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，在特定光的激发下R发出荧光，随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值(达到荧光阈值所经历的循环次数)。下列相关叙述正确的是（）

A . 荧光基因R连接在探针的3’端 B . 该反应体系中并未加入ATP，所以新链的合成不需要消耗能量 C . TaqDNA聚合酶在该反应中的作用是合成磷酸二酯键 D . Ct值越小，说明样品中特定DNA序列的含量越多

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1. (2024高二下·定海月考) 病毒侵染植物时，植物识别外源的核酸并启动一系列的调控机制来降解病毒的RNA。研究人员改造病毒载体，使其携带目的基因cDNA后侵染植物，最终特异性降解目的基因mRNA，即病毒诱导的基因沉默技术（VIGS），RNA病毒TSWV能侵染辣椒，科研人员推测用VIGS技术沉默TSWV的N基因可使辣椒抵抗TSWV，进行如下实验。
1. （1）用改造的病毒TRV作为载体，与TSWV的N基因连接，构建重组载体TRV—N（如下图），通过农杆菌转化法导入辣椒细胞。请完善制备TRV—N的技术路线：获取N基因的mRNA→→PCR→→连接成TRV—N。
3. （2） C基因是类胡萝卜素合成关键酶的基因，当类胡萝卜素合成途径被阻断，植物出现白化现象。用上述方法构建重组载体TRV—C并导入辣椒细胞，作为构建沉默体系的对照。若辣椒出现白化表型，说明。
5. （3） TSWV侵染辣椒植株会使其叶片出现明显的褪绿、黄化斑等症状，以易感TSWV的辣椒作为实验材料，实验分组及处理如下表。
  组别
  实验处理
  第1组
  第2组
  第3组
  导入TRV—C
  +
  —
  —
  导入TRV—N
  —
  —
  +
  ？
  —
  +
  +
  注：+代表添加，—代表不添加
  ①表中“？”的处理为。
  ②为使实验结果更准确，除设置空白对照组外，还应该增加第4组，其实验处理为。
  ③观察各组辣椒叶片状态和颜色，若结果为，则说明沉默TSWV的N基因可使辣椒抵抗TSWV。
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1. (2024高二下·福田月考) 镰状细胞贫血是一种单基因遗传病，由正常血红蛋白基因(HbA)突变为异常血红蛋白基因(Hbs)引起，它们的某片段如图甲。现对一胎儿进行基因检测，主要原理：限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，加热使酶切片段解旋后用荧光标记的 CTGACTCCT 序列与其杂交，最后电泳分离。图乙为电泳后荧光出现的三种可能性。下列叙述不正确的是（）

A . 提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA 需要添加特定的引物 B . 若该胎儿检测结果为图乙一b，则其为镰状细胞贫血患者 C . 荧光标记序列越长，图乙-c中两个 DNA 条带间的距离越大 D . 用限制酶MstⅡ处理 DNA不充分，可能把正常人误判为携带者

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1. (2024高二下·封开期中) PCR是多聚酶链式反应的缩写。下列叙述错误的是（　　）

A . RCR的原理是DNA半保留复制 B . 利用PCR扩增目的基因需要解旋酶 C . PCR扩增目的基因需要合成引物 D . PCR可在短时间内大量扩增目的基因

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1. (2024高二下·肇庆期中) 在基因工程中涉及到DNA的提取、目的基因的扩增及电泳鉴定，下列有关叙述正确的是（）

A . 利用DNA不溶于酒精、不能溶于2mol/L的NaCl溶液的性质，可进行DNA的粗提取 B . 待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 C . 在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下会逐渐产生砖红色沉淀 D . PCR过程中，耐高温的DNA聚合酶需先与启动子结合，继而从引物的3^'端延伸子链

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