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1. (2020·海淀模拟) 在基因工程操作中，科研人员利用识别两种不同序列的限制酶（R₁和R₂）处理基因载体，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果如图所示。以下相关叙述中，不正确的是（）

A . 该载体最可能为环形DNA分子 B . 两种限制酶在载体上各有一个酶切位点 C . 限制酶R₁与R₂的切点最短相距约200 bp D . 限制酶作用位点会导致氢键和肽键断裂

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1. (2023高二下·遵义期末) 柑橘溃疡病是由地毯草黄单胞杆菌引起的、发生在柑橘的一种病害。利用基因工程将来自水稻的Xa27基因导入柑橘外植体细胞，再利用植物组织培养技术可培育无病毒植株。如图表示科研人员利用柑橘幼苗获得抗病转基因植株的过程，回答下列问题：
1. （1）获得转基因抗病柑橘的核心步骤是，该过程的操作工具包括。
3. （2）共培养时，Ti质粒的作用是。
5. （3）脱分化与再分化过程中所用培养基需要更换，其中（填激素名称）的浓度和比例都会影响植物细胞的发育方向。
7. （4）从个体生物学水平鉴定转基因柑橘植株时，发现有几株不具备抗病能力，某同学推测是由于目的基因未成功导入受体细胞，另一同学认为还有可能是因为。
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1. (2023高二下·合肥期末) 研究人员将大麦细胞的LTP1基因导入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌可产生LTP1蛋白，并酿出泡沫更加丰富的啤酒，下图为转基因啤酒酵母的生产过程。回答下列问题：
1. （1）已知DNA复制时子链的延伸方向是5'→3'，图1中A、B、C、D在不同情况下均可以作为引物，用PCR技术扩增LTP1基因时应该选用作为引物。
3. （2）是实施基因工程的核心。图2中的B为质粒，质粒和LTP1基因结合形成重组质粒C.重组质粒C在受体细胞中能够稳定存在并发挥作用，在LTP1基因的首端必须具有，尾端必须具有终止子，还必须含有标记基因和目的基因。
5. （3）为检测目的基因在受体细胞基因组中的整合情况，首先采用DNA分子杂交技术检测LTP1基因是否导入成功，需要从转基因啤酒酵母中提取DNA，用作探针与之杂交。
7. （4）为检测转基因啤酒酵母是否产生LTP1蛋白，除检测LTP1蛋白是否产生及含量外，还可观察转基因啤酒酵母所酿啤酒的进行判断，若能检测到LTP1蛋白，但效果差，可能的原因是；若经检测确定细胞中无LTP1蛋白，可采用PCR技术检测细胞中的RNA，如果能检测到mRNA，则可能是；如果检测后确定细胞中无LTP1蛋白的mRNA，但之前能检测到LTP1基因，则LTP1基因未能正常转录的原因可能是。
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1. (2023高二下·应县期末) 将富含赖氨酸的蛋白质编码基因导入玉米细胞，可以提高玉米中的赖氨酸含量；更换赖氨酸形成过程中的天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶的个别氨基酸，使两种酶的活性提高，也可以提高玉米中的赖氨酸含量。以上两种技术分别属于(　　)

A . 基因工程、基因工程 B . 蛋白质工程、蛋白质工程 C . 基因工程、蛋白质工程 D . 蛋白质工程、基因工程

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1. (2023高二下·运城期末) 在基因工程操作中常用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不同DNA片段。科研人员利用EcoRI和SamI两种限制酶处理某DNA分子，得到如下电泳图谱。其中1号泳道是标准DNA样品，2号、3号、4号分别是EcoRI单独处理、SamI单独处理、EcoRI和SamI共同处理后的电泳结果。下列说法错误的是（）

A . 该DNA可能是含1000bp的环状DNA分子 B . 据图可知该DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个 C . EcoRI和SamI能够催化磷酸二酯键断裂 D . EcoRI和SamI的切点最短相距约800bp

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1. (2023高三上·南京期中) 蛋白质甲基化是最广泛的翻译后修饰之一，组蛋白甲基转移酶G9a主要修饰蛋白质中赖氨酸、精氨酸，从而调控基因表达。酵母细胞基因转录因子GAL4－BD（含赖氨酸）和GAL4-AD两结构域结合时才能激活转录。为了筛选赖氨酸甲基化阅读器(甲基化的赖氨酸是“阅读器”的识别、结合位点)，研究人员进行了如下图1所示实验，其中TRP1、LEU2分别是色氨酸、亮氨酸合成基因，G9a－SET基因表达产物（含G9a）能与GAL4－BD基因表达产物结合。当赖氨酸甲基化阅读器与G9a－SET－GAL4－BD复合体相互作用后，GAL4－BD和GAL4-AD一起激活报告基因LacZ转录（如下图2），LacZ表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题：
1. （1）组蛋白甲基化影响基因表达水平，并可遗传给后代，这属于现象。
3. （2）通过PCR技术扩增“阅读器”基因时，引物设计的质量是决定PCR成功与否的关键。首先从核酸数据库中获得“阅读器”基因的编码序列，然后在引物5′端添加的碱基序列为，其目的是。
5. （3）图3为PCR过程的程序参数，在PCR反应体系配制完成后，先冰上预冷，等程序设置完毕后再放入PCR仪中，这种“预冷”处理的优点有。Step1和Step8的主要目的分别是。由于Step3引物含有，不能和模板完全匹配，所以Step3的温度比Step6要低一点。
7. （4）质粒a、b导入代谢缺陷酵母菌时，需用醋酸锂(LiAC)处理酵母菌，其目的是使酵母菌细胞处于一种。两培养基中需分别不添加才可筛选出导入重组质粒的酵母菌。与体外扩增相比，将质粒导入酵母菌扩增的优点有。
9. （5） Y2H和Y187接合生殖、培养时，培养基中添加X-gal，菌落呈色的接合子Y3H中含所需的“阅读器”。
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1. (2023高三上·保定期中) 对果树进行矮化栽培可提高经济效益，下列相关叙述错误的是（）

A . 矮化果树分配至营养器官的光合产物减少，有利于果实增产 B . 利用基因工程导入矮化基因，可选择体细胞作为受体细胞 C . 对果树进行“打顶”去除其顶端优势，可培育矮化植株 D . 对果树幼苗施加适宜浓度的赤霉素，可培育矮化植株

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1. (2023高三上·济南开学考) 某研究机构通过研究发现，植物害虫烟粉虱通过水平基因转移过程获取所捕食植物中的遗传物质，比如可将番茄的酚糖酰基转移酶基因（BtPMaT1）整合到了自己的基因组后，BtPMaT1表达出的酚糖酰基转移酶使烟粉虱将摄入的酚糖（番茄的次生代谢产物）分解，避免烟粉虱中毒死亡。科研人员利用细胞中dsRNA调控烟粉虱BtPMaT1表达的相关作用机制，如图1所示。培育了一种转基因番茄，该种番茄中转入能表达双链RNA的烟粉虱BtPMaT1基因，培育过程如图2所示。该种转基因番茄可以有效控制存在BtPMaT1基因烟粉虱的数量。回答下列问题：
1. （1）烟粉虱通过BtPMaT1水平基因转移而获得的中和酚糖新性状的来源属于。除此以外，研究发现一些位于质粒、噬菌体等结构的基因可通过水平基因转移扩散到其他物种中并表达，水平基因转移实现表达的基础是。
3. （2） dsRNA可以防治烟粉虱的原因是，该种防治对于生态环境相对友好，理由是。
5. （3）在利用转基因番茄再次验证烟粉虱BtPMaT1基因的功能过程中，科研人员根据与Bt-PMaT1基因的mRNA互补的非编码RNA设计上游引物为5'CCCTCGAGTCTGCAGA-CATGGAGACGAC3'，下游引物为5'GAAGATCTTACAGCCAAACACGCAGTTC3'。供选择的限制酶共四种，如表所示。
  
  BamHⅠ
  
  BglⅡ
  
  XhoⅠ
  
  SalⅠ
  
  5'G↓GATCC3'
  
  5'A↓GATCT3'
  
  5'G↓TCGAG3'
  
  5'G↓TCGAC3'
  
  应选择酶切割PCR产物和载体，构建基因表达载体。选用双酶切法切割目的基因和载体的原因是。
7. （4）为确定转基因番茄防治烟粉虱的效果，科研人员进行了相关实验。实验过程中首先检测了BtPMaT1基因的表达水平，其目的是。然后将BtPMaT1基因干扰成功的烟粉虱接种到番茄叶片上，统计烟粉虱的成活率。
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1. (2023高一上·济南月考) 《生物学通报》2022年第12期登载文章《光合作用及其模拟技术在人类疾病治疗中的应用》，介绍了光合作用模拟及蓝藻基因工程改造在心脏病、肿瘤、糖尿病慢性伤口愈合和中风等缺氧疾病治疗中的应用。心脏病、肿瘤等疾病的共同点是缺氧引起的组织损伤，而伤口在治疗过程中也容易造成氧缺乏。蓝藻是一种原核生物，其通过光合作用可降低病变组织的二氧化碳含量，并产生氧气。随着合成生物学技术的发展，对叶绿体基因组进行改造后，藻类植物还可以用来生产药物和疫苗。下列叙述正确的是（）

A . 蓝藻细胞内含有叶绿素，能将光能转化成化学能 B . 利用蓝藻生产的疫苗，可用来预防疾病，这种免疫属于非特异性免疫 C . 蓝藻与衣藻相比，主要区别是没有成形的细胞核 D . “对叶绿体基因组进行改造”所应用的技术是克隆技术

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1. (2023高三上·重庆市开学考) CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（）

A . Cas9蛋白相当于限制酶，切割特定基因位点的脱氧核糖和碱基之间的化学键 B . 向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸 C . CRISPR/Cas9技术编辑基因有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越短，脱靶率越低 D . 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和不同的sgRNA进行基因编辑

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