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1. (2024高二下·衡水期中) 作为基因工程中的“分子运输车”——载体，应具备的条件是（）
①必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上
②载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制
③必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选
④必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去

A . ①③④ B . ②③④ C . ①②④ D . ①②③④

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1. (2024高二下·衡水期中) 下列有关重组DNA技术基本工具的叙述正确的是（　　）

A . DNA聚合酶是构建重组DNA分子必需的工具酶 B . 不同的限制酶切割产生的黏性末端一定不同 C . 相同黏性末端连接形成的DNA片段，一定会被原限制酶识别 D . 质粒做为基因工程常用的载体，并不是原核细胞特有的结构

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1. (2024高二下·信宜月考) 研究人员制备哺乳动物膀胱生物反应器，用其获得人体特殊功能蛋白W的基本过程如下图所示。下列有关叙述正确的是（）

A . 步骤①和②所代表操作分别是显微注射、受精卵获能 B . 步骤③的代孕性体无需进行同期发情处理 C . 可收集膀胱生物反应器的尿液来提取W D . 转基因的动物乳腺上皮细胞与膀胱上皮细胞中都能表达W基因

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1. (2024高二下·信宜月考) 基因工程载体必须具备的条件中，错误的是（）

A . 载体必须是安全的，不会对受体细胞有害 B . 具有一或多个限制酶切点，以便与外源基因连接 C . 必须含有标记基因，标记基因的成功表达也就意味着目的基因成功表达 D . 载体必需具备自我复制能力或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制

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1. (2024高二下·信宜月考) 下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是（）

A . 用NaCl处理细菌B使其处于感受态可吸收重组质粒 B . 将完成导入的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C . 将完成导入的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，含有重组质粒的细菌无法生长 D . 可利用PCR技术检测人的生长激素基因是否在工程菌中转录和翻译

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1. (2024高二下·信宜月考) 棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫，为减少农药的使用量，我国科学家利用基因工程培育出一些能抵抗虫害的植物新品种。Cry1A基因的表达产物对棉铃虫等鳞翅目昆虫有较强的毒性，GNA基因的表达产物对蚜虫等刺吸式口器的昆虫有较强的毒性。科研人员将Cry1A基因与GNA基因连接在一起，构建了双抗虫基因的重组表达载体，并转入烟草细胞，获得了具有双抗性的转基因烟草，其部分过程如图1所示，请分析并回答以下问题：
注：图中PstⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ表示限制酶，不同限制酶切出的黏性末端均不同；Klenow能将黏性末端转变为平末端。
1. （1）过程③将Cry 1A基因与GNA基因相连，可选用（填“E·coli DNA连接酶”或“ $\text{[math]}$ DNA连接酶”）。
3. （2）过程④应该选用（填图中限制酶）切割植物表达载体，以便与目的基因相连，形成重组表达载体。
5. （3）将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用处理农杆菌，使其成为细胞。
7. （4）让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌：将培养农杆菌的培养基倒平板后均分为A、B两组，在A组培养基中涂布一定量的链霉素，在B组培养基中涂布等量的卡那霉素和链霉素。往A组培养基中接种适量农杆菌，待长出菌落后，用影印法接种到B组培养基上，实验结果如图2，其中（填图中对应的数字）菌落对应的农杆菌可能是符合要求的，即含有的农杆菌。
9. （5）欲从个体生物学水平鉴定这些转基因烟草是否具有双抗虫特性以及抗性的程度，请你简述该鉴定方法。
11. （6）利用转基因技术可以培育出具有优良性状的生物，生产出人类所需要的产品。但转基因技术的安全性问题也一直备受关注。当面对日常生活中与转基因技术有关的话题时，我们需要理性地表明观点和参与讨论。下列属于理性看待转基因技术的是（填序号）。
  ①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，必须禁止转基因技术的应用
  ②要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题
  ③要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响
  ④要看到经济、文化和伦理道德观念等的差异使人们对转基因技术有不同的看法
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1. (2024高三下·湛江模拟) 通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2 表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS 细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列叙述正确的是（）

A . 两种方法都需要运用动物细胞培养技术，需要将细胞置于含有95%O₂和5%CO₂的混合气体的CO₂培养箱中 B . 利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质均与患者的完全相同，因此移植后不会发生免疫排斥反应 C . 可利用农杆菌转化法或显微注射法将Oct3/4 基因、Sox基因、c-Myc 基因和Klf基因导入成纤维细胞 D . 图2中卵母细胞去核实际去除的是纺锤体—染色体复合物，核移植时供体细胞不用去核，可整个注入去核的卵母细胞中

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1. (2024高三下·湛江模拟) 研究低温条件下番茄细胞WHYI 基因对光合作用的影响，对于温度敏感型蔬菜作物的栽培具有重要的实践意义。回答下列问题：
1. （1）研究人员利用重组DNA 技术，将克隆的WHYI 基因与外源高效启动子连接，导入番茄基因组中构建WHYI 基因的过表达植株（W⁺），如图1所示。启动子是识别、结合酶的部位。若限制酶切割WHYI 基因和番茄基因组后形成相同的黏性末端（即图中Ⅰ、Ⅱ处），则会出现（答出2点）等情况，从而导致构建过表达植株的成功率下降。
3. （2） PCR 的产物一般通过电泳来鉴定，结果如图2所示。1号泳道为标准，2号泳道为阳性对照（提纯的相关蛋白基因片段），3号泳道为实验组。1 号泳道的条带实质为_，若3号泳道有杂带（非目的 DNA 片段）出现，则原因可能是（答出2 点）。
5. （3）小干扰 RNA（siRNA）能诱导特定基因转录出的 mRNA降解，导致基因沉默。研究人员据此构建了 WHYI 基因的沉默植株（W^-），siRNA 因阻图2断了过程而关闭了WHYI 基因。进一步研究发现，番茄细胞WHYI 基因影响光反应阶段 D1 蛋白（可捕捉光能）的含量，且与温度有关。研究人员用特定抗体检测D1蛋白在叶绿体内的含量，结果如表所示。该实验中的自变量为，对比三种番茄的D1蛋白含量可得到的结论是。
  温度
  25 ℃
  4℃
  植株类型
  W⁺
  W
  W^-
  W⁺
  W
  W^-
  D1 蛋白含量
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1. (2024高三下·楚雄模拟) 二十碳五烯酸（EPA）能促进体内饱和脂肪酸代谢，具有降低血液黏稠度、预防心脑血管疾病的功效。研究人员利用转基因技术从海洋生物中提取了EPA合成途径的关键基因pfaB，并将其导入酵母菌内，通过酵母菌发酵生产EPA。图1和图2分别是转基因过程中使用的含目的基因的DNA片段和质粒。回答下列问题：
1. （1）为确保目的基因导入酵母菌后能稳定复制和表达，需要在图2质粒中加入（答出三点）等结构才行。若要将pfaB基因导入植物细胞，可采用（填一种）法。
3. （2）据图可知，为了使目的基因和质粒定向连接，构建重组质粒时应选择限制酶对基因pfaB和质粒进行切割。用PCR技术对基因pfaB进行扩增时，要向仪器中加入足量的引物（填图1中数字），以保证扩增的正常进行。PCR缓冲液中要添加适量的Mg²⁺ ，其目的是。PCR结束后可采用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定，一定pH下，在电场中，DNA分子会向着的电极移动，DNA分子在凝胶中的迁移速率与（填两种）等因素有关。
5. （3）有人认为将基因pfaB导入大肠杆菌细胞中，无法得到具有相应生理功能的表达产物，其理由是。
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1. (2024高三下·曲靖模拟) 继世界首例猪心脏移植患者去世后，第二例猪心脏移植患者也于2023年10月31日去世，心脏移植需要解决的问题之一是防止心脏发生缺血再灌注损伤（IRI），研究发现根据Caspase8基因合成的siRNA可使Caspase8基因表达受阻，从而抑制IRI所致的器官损伤，下图是利用猪的心肌细胞进行siRNA作用研究的示意图，请据图回答以下问题：
1. （1）获得siRNA对应的DNA序列后可利用PCR技术进行扩增，常采用（填方法）来鉴定PCR的产物；基因工程的核心步骤过程②是，该过程需要将siRNA对应的DNA序列正确插入到之间。
3. （2）对猪的心肌细胞进行培养时需要加入血清等天然物质，原因是。
5. （3）据图可知siRNA阻止Caspase8基因表达的原理是。
7. （4）虽然两例手术都以失败告终，但是也给科学带来极大的进步，你认为异种器官如果移植成功，将可以解决哪些问题?（答两点）。
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