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1. (2024高三下·广西模拟) 研究发现，成年小鼠的Y染色体上双外显子SRY（SRY-T）才是真正的睾丸决定因素。缺少SRY-T的雄性小鼠（XY）发育为雌性，而携带SRY-T转基因的雌性小鼠（XX）发育为雄性。请回答问题：
1. （1）要确定从Y染色体上获得的DNA片段中是否含有SRY-T，先获得相应DNA片段并进行PCR扩增，扩增时需要种引物。PCR扩增过程中温度呈“升温→降温→升温”的周期性变化，“降温”的作用是。对扩增产物进行检测时用作为探针，若出现杂交带，则（填“含有”或“不含有”）SRY-T基因。
3. （2）图为验证SRY-T能决定雄性性别的实验过程，将含SRY-T的基因表达载体导入小鼠（性染色体为XX）体内，导入雄原核的原因是。
5. （3）植入代孕母鼠的小鼠早期胚胎性染色体需要为XX，可检测囊胚期细胞进行筛选。进行胚胎移植时代孕母鼠是（答出2点即可）的个体。在获得的子代小鼠中出现（填“雄性”或“雌性”）小鼠，证明SRY-T基因决定雄性性别。
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1. (2024高三下·广西模拟) 基因工程中常采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞。某科研小组欲将某抗虫基因导入某植物，下列分析错误的是（）

A . 应该将抗虫基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA片段内 B . 可以用农杆菌侵染水稻、玉米等单子叶植物 C . 目的基因与Ti质粒的结合未涉及碱基互补配对原则 D . 转基因是否成功最简便的鉴定方法是观察该植物有没有抗虫性状

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1. (2024·广东模拟) 玉米螟严重影响我国玉米的生长发育，导致玉米产量和品质下降。苏云金芽孢杆菌（BT菌）的cry1Ab、cry1F基因分别编码的杀虫蛋白均可有效杀灭玉米螟，但单一使用时有可能导致害虫形成抗性。为控制玉米螟数量、延缓其抗性的产生，科研人员利用转基因技术将cry1Ab、cry1F基因导入玉米中，获得了转复合Bt基因玉米。请回答下列问题：
1. （1）不同生物对于密码子的使用有一定偏好。为提高外源基因的表达量，需根据玉米的密码子使用频率对抗虫基因cry1Ab、cry1F进行剪辑、优化后再拼接到基因表达载体上。抗虫基因cry1Ab、cry1F经剪辑、优化、表达后，基因的碱基排列顺序（填“改变”或“不改变”），杀虫蛋白的氨基酸序列（填“改变”或“不改变”）。
3. （2）利用农杆菌转化方法将基因表达载体导入受体玉米材料中，经筛选获得多个阳性植株（B）。将B与高产玉米品种A采用回交转育的方法（过程如图12）得到品系BFL4-1。采用和凝胶电泳等方法对BFL4-1回交不同世代（BC₄F₁、BC₅F₁）中阳性植株的DNA进行扩增检测，结果如图13。该结果说明目的基因均已整合到玉米基因组中，并且。因为回交不同世代中阳性植株与阴性植株比例均接近，因此可推测外源基因片段在染色体上为单一位点插入。
5. （3） BFL4-1若能在实际种植中延缓玉米螟抗性的产生，需要满足的假设是：crv1Ab、cry1F基因分别编码的杀虫蛋白具有.
7. （4）有另外的科学家提议，将BFL4-1的阳性个体自交得到的后代在大田中种植，也可以起到延缓玉米螟抗性的产生。请解释这种方法的合理性或指出这种方法的一个缺点。
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1. (2024高二下·高州期中) 重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为科学家通过培育出转基因山羊生产rhTPO的过程。其中编号①-⑨表示过程，A表示含有rhTPO基因的DNA，四种限制性内切核酸酶的识别序列及切割位点见下表，请回答下列问题：
限制酶
BglⅡ
BamHI
HindⅢ
XbaI
识别序列和切割位点
G↓GATCC
A↓GATCT
A↓AGCTTT
↓CTAGA
1. （1） ②过程需要的限制性内切核酸酶是（从题干表格中选取）。为了使目的基因能够表达，构建重组质粒时，目的基因的上游必须有，其为酶的识别和结合部位。
3. （2）体外受精时需要将卵母细胞培养至期。将重组质粒导入受精卵的方法是。
5. （3）为使受体母羊更好的接受植入的胚胎，需提前对其进行处理；培育转基因羊的过程，用到的胚胎工程技术有（写出两种）。
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1. (2024高二下·高州期中) 科学家提取苏云金杆菌的Bt抗虫蛋白基因导入棉花细胞，成功培育出转基因抗虫棉。下列叙述错误的是（）

A . 将Bt基因导入棉花细胞采用我国科学家独创的花粉管通道法 B . Bt抗虫蛋白能破坏鳞翅目昆虫的消化系统与其碱性环境有关 C . Bt基因能在棉花中表达说明细菌和棉花共用一套遗传信息 D . PCR扩增Bt基因时，反应缓冲液中一般要添加Mg²⁺来激活耐高温的DNA聚合酶

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1. (2024高二下·衡水期中) 作为基因工程中的“分子运输车”——载体，应具备的条件是（）
①必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上
②载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制
③必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选
④必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去

A . ①③④ B . ②③④ C . ①②④ D . ①②③④

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1. (2024高二下·衡水期中) 下列有关重组DNA技术基本工具的叙述正确的是（　　）

A . DNA聚合酶是构建重组DNA分子必需的工具酶 B . 不同的限制酶切割产生的黏性末端一定不同 C . 相同黏性末端连接形成的DNA片段，一定会被原限制酶识别 D . 质粒做为基因工程常用的载体，并不是原核细胞特有的结构

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1. (2024高二下·信宜月考) 基因工程载体必须具备的条件中，错误的是（）

A . 载体必须是安全的，不会对受体细胞有害 B . 具有一或多个限制酶切点，以便与外源基因连接 C . 必须含有标记基因，标记基因的成功表达也就意味着目的基因成功表达 D . 载体必需具备自我复制能力或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制

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1. (2024高二下·信宜月考) 棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫，为减少农药的使用量，我国科学家利用基因工程培育出一些能抵抗虫害的植物新品种。Cry1A基因的表达产物对棉铃虫等鳞翅目昆虫有较强的毒性，GNA基因的表达产物对蚜虫等刺吸式口器的昆虫有较强的毒性。科研人员将Cry1A基因与GNA基因连接在一起，构建了双抗虫基因的重组表达载体，并转入烟草细胞，获得了具有双抗性的转基因烟草，其部分过程如图1所示，请分析并回答以下问题：
注：图中PstⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ表示限制酶，不同限制酶切出的黏性末端均不同；Klenow能将黏性末端转变为平末端。
1. （1）过程③将Cry 1A基因与GNA基因相连，可选用（填“E·coli DNA连接酶”或“ $\text{[math]}$ DNA连接酶”）。
3. （2）过程④应该选用（填图中限制酶）切割植物表达载体，以便与目的基因相连，形成重组表达载体。
5. （3）将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用处理农杆菌，使其成为细胞。
7. （4）让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌：将培养农杆菌的培养基倒平板后均分为A、B两组，在A组培养基中涂布一定量的链霉素，在B组培养基中涂布等量的卡那霉素和链霉素。往A组培养基中接种适量农杆菌，待长出菌落后，用影印法接种到B组培养基上，实验结果如图2，其中（填图中对应的数字）菌落对应的农杆菌可能是符合要求的，即含有的农杆菌。
9. （5）欲从个体生物学水平鉴定这些转基因烟草是否具有双抗虫特性以及抗性的程度，请你简述该鉴定方法。
11. （6）利用转基因技术可以培育出具有优良性状的生物，生产出人类所需要的产品。但转基因技术的安全性问题也一直备受关注。当面对日常生活中与转基因技术有关的话题时，我们需要理性地表明观点和参与讨论。下列属于理性看待转基因技术的是（填序号）。
  ①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，必须禁止转基因技术的应用
  ②要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题
  ③要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响
  ④要看到经济、文化和伦理道德观念等的差异使人们对转基因技术有不同的看法
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1. (2024高三·茂名模拟) 融合蛋白是指利用基因工程等技术将某种具有生物学活性的功能蛋白分子与其他蛋白融合而产生的新型蛋白，常用于亲和蛋白质纯化和抗体药物的研发。图是原核细胞融合蛋白基因表达载体，科研工作者在启动子Pc下游插入了两个与分离纯化有关的编码序列——谷胱甘肽转移酶基因（GST基因）及凝血蛋白酶切割位点的编码序列。
回答下列问题：
1. （1）构建基因表达载体时，需要用到的工具有。上述融合表达载体中启动子Ptac的作用是。
3. （2）当外源基因插入后，可表达出由（填“二”或“三”）部分序列组成的融合蛋白。
5. （3） GST对谷胱甘肽有很强的结合能力。将谷胱甘肽固定在琼脂糖树脂上形成亲和层析柱，当表达融合蛋白的全细胞提取物通过层析柱时，将吸附在树脂内，其他细胞蛋白先被洗脱出来。接着用含游离的还原型谷胱甘肽的缓冲液将融合蛋白洗脱。最后用切割融合蛋白，即可获得纯化的目的蛋白。
7. （4） Fc融合蛋白由某种具有生物学活性的功能蛋白分子与抗体恒定区的Fc片段融合而成。该类融合蛋白不仅保留了功能蛋白分子的生物学活性，并且还具有一些抗体的性质，如长效半衰期。抗原在血浆中游离时间越久，越容易被蛋白酶降解。
  ①利用哺乳动物细胞表达Fc融合蛋白比在原核细胞中表达更具优势的理由是。
  ②目前疫苗设计的关键在于有效活化抗原呈递细胞（APC），APC表面能够表达Fc受体，常利用抗原—Fc融合蛋白作为抗原运载工具，其原因是。
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