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1. (2024·贵州模拟) 由C基因编码的C蛋白和V基因编码的V蛋白均能特异性杀死玉米害虫，这两种蛋白的结构和作用原理不同。现利用C—V融合基因和如图所示载体，获得具高抗虫性的转基因玉米。下列有关叙述错误的是（）

A . 构建含有C—V融合基因的载体需要限制酶和DNA连接酶 B . 载体中的目的基因可以通过农杆菌的转化进入玉米细胞 C . 在玉米细胞染色体DNA上检出C—V基因就说明培育成功 D . 以单转C基因玉米为食比以该玉米为食的害虫更易产生抗性

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1. (2024·贵州模拟) 在植物基因工程中外源基因表达量不足是目前利用转基因植物生产植物疫苗时存在的问题之一。研究表明，启动子的串联能增强外源基因的表达，研究人员拟构建含有两个35s启动子（35s启动子是花椰菜花叶病毒的一种强启动子）串联的转基因苜蓿。一个35s启动子包括1个A区和2个B区。图甲表示35s启动子及其附近区域分布的限制酶识别位点，已知不同限制酶切割后得到的黏性末端各不相同。图乙表示待转入第二个35s启动子的重组质粒的构成组件及其上的限制酶识别位点。
1. （1）利用PCR技术可以扩增35s启动子，PCR技术的原理是，此技术设计引物很关键，引物是。利用此技术扩增的35s启动子可以在PCR扩增仪中自动完成，完成以后，常采用来鉴定PCR的产物。
3. （2）根据限制酶识别位点，为了让第二个35s启动子准确串联在待转入的重组质粒上，应选择限制酶切割图甲的DNA片段。
5. （3）为了筛选出正确串联了两个35s启动子的新重组质粒菌落，研究人员用含有不同抗生素的平板进行筛选，平板类型丙和丁加入的抗生素分别是、，得到①②③三类菌落，其生长状况如下表（+代表生长，-表示不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是（填“①”“②”或“③”）类。若新获得的转基因苜蓿中目的基因的表达量大幅增加，可以说明串联两个35s启动子能。
  平板类型
  ①
  ②
  ③
  甲：无抗生素
  +
  +
  +
  乙：卡那霉素
  -
  -
  +
  丙：？
  -
  +
  +
  丁：？
  -
  -
  +
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1. (2024高三下·广州模拟) 人乳铁蛋白（hLTF）是一种铁结合的糖蛋白，具有抑菌、提高免疫力等重要功能。研究者通过转基因技术培育能生产hLTF的奶牛，从牛奶中分离提纯hLTF，回答下列问题。
1. （1）从原核生物中获取的质粒不适用于直接构建真核生物的表达载体，其启动子需要进行替换才有可能在真核细胞中表达，主要原因是。
3. （2）研究人员采用小鼠乳清酸蛋白基因的启动子和终止子来替换pA 质粒中的部分序列，再拼接hLTF 基因，最终形成pW2-hLTF 重组质粒，过程如下图：
  注：Nrul、Mlul和Notl是三种限制酶，图中表示相应限制酶的识别序列和切割位点。pA、pW1、pW2和pW2-hLTF表示不同阶段的质粒。
  通过PCR 扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子、终止子和hLTF 基因时，均需引入限制酶的识别序列和切割位点，以便剪接到质粒的指定位置。据图分析，PCR 扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子所需的两种引物应分别包含、（限制酶）的识别序列，将修饰后的hLTF基因插入到重组质粒的启动子和终止子之间后，不一定能获得所需要的基因表达载体，原因是。
5. （3）经检测筛选所获得的基因表达载体pW2-hLTF通过的方法导入到奶牛的受精卵细胞中，以获得能产生hLTF 的转基因奶牛。
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1. (2024高三·广东模拟) 利用农杆菌转化法将苏云金杆菌的Bt基因导入棉花细胞获得抗虫棉，可有效减少农药使用，提高棉花产量。下列相关叙述错误的是（　　）

A . 农杆菌转化法和肺炎链球菌转化实验的原理相同 B . 苏云金杆菌和棉花的基因都是有遗传效应的DNA片段 C . 农杆菌转化法一般需要农杆菌的Ti质粒作为表达载体 D . 由该种方法获得的转基因抗虫棉无法将抗虫基因遗传给子代

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1. (2024高三·广东模拟) 果蝇Y染色体上的SRY基因决定雄性性别的发生，在X染色体上无等位基因。为实现基于体色持续分离雌雄，培育果蝇的性别自动鉴定体系，研究人员设计了相关的诱变育种方案。据此回答下列问题：
1. （1）果蝇的灰色（B）对黑色（b）为显性。研究人员用射线照射果蝇M如图，已知射线照射后Y染色体携带SRY基因的片段可转移到其他染色体上且能正常表达，不含SRY基因的染色体片段丢失。该过程涉及的变异类型是。
3. （2）研究人员将射线照射后的果蝇M与正常黑色雌果蝇杂交，统计后代雄果蝇的性状及比例，得到部分结果如下表所示。已知只含一条染色体的雌果蝇胚胎致死，其他均可存活且繁殖能力相同。
  　
  Ⅰ组
  Ⅱ组
  Ⅲ组
  子代雄果蝇的性状及比例
  灰色∶黑色=1∶1
  灰色∶黑色=1∶0
  灰色∶黑色=0∶1
  ①Ⅰ组结果说明果蝇携带SRY基因的染色体片段转移到（填“X”“B所在的”或“b所在的”）染色体，其子代黑色雄果蝇的基因型是。
  ②第组的杂交模式的后代可持续应用于生产实践，原因是，其优势是可通过果蝇的体色筛选即可达到分离雌雄的目的。
  ③Ⅱ组子代连续随机交配多代后，子代雌性个体所占的比例会。
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1. (2024高三·广东模拟) 某种病毒可通过其S蛋白和RBD蛋白与人体细胞表面的受体结合而进入细胞，是宿主抗体的重要作用位点。下图是科研人员利用该病毒S蛋白基因和RBD蛋白基因，研制该病毒双抗原疫苗的技术路线。
1. （1） PCR扩增时，需在催化下，在两种引物的端进行DNA链的延伸，获得扩增产物。
3. （2）为使S-RBD基因能与pX质粒相连接，并在工程菌中表达时先合成S蛋白，则PCR过程中，应在引物1的5^'端添加的限制酶序列是。
5. （3）将重组pX质粒导入工程菌前，需用钙离子处理工程菌，使其处于一种的生理状态，便于重组质粒的导入。
7. （4）在工程菌的筛选时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（即先将工程菌接种到培养基A上，待长出菌落后使用无菌的绒毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上），则培养基A上应添加的抗生素为（填“青霉素”或“四环素”）。若培养基B中有存活的菌落，则这些菌落的细胞内（填“含”或“不含”）S-RBD基因。鉴定pX质粒和重组pX质粒是否导入工程菌还可以采用的方法是。
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1. (2024高三·大亚湾模拟) DNA双链断裂（DSB）是真核生物中一种严重的DNA损伤形式，哺乳动物体内存在相关机制修复DSB。在修复过程中可能会发生改变遗传信息的情况，例如丢失DNA上的甲基化信息（表观遗传信息改变）或发生基因突变，从而对基因的表达产生影响。已知DSB可以导致生物个体衰老，但相关的分子机制尚未明确。回答下列问题：
1. （1）用I-PpoI酶处理DNA可导致DSB，作用机理见图1。I-PpoI酶由I-PpoI基因编码，能够识别主要存在于非编码区（DNA中不能编码蛋白质的区段）的序列5^'-CTCTCTTAAGGTAGC-3^' ，使第9位A与第10位G之间的键断开，据此可知该酶属于酶。科学家选用该酶诱发DSB，可以尽量减少带来的影响。
3. （2）为了探究DSB是通过表观遗传信息改变还是基因突变导致衰老，科学家以小鼠作为研究材料进行相关实验。该实验的流程大致如图2：
  ①在实验前，利用基因工程技术将I-PpoI基因导入到小鼠细胞中，诱导表达后需通过法检测细胞内是否产生I-PpoI酶。若产生I-PpoI酶，则会导致实验组小鼠发生信息的变化。表观年龄是根据整个基因组有多少碱基失去了原有的甲基作为测量依据。实验前，对照组和实验组小鼠的表观年龄应。
  ②若实验结果为：与对照组相比，实验组小鼠；且当实验组出现明显的衰老表型时，对照组依然保持年轻的状态，则证明DSB引起的表观遗传变化导致衰老。
  ③若出现上述实验结果，科学家还需要对实验组小鼠进行基因治疗，使其恢复年轻时的表观遗传信息。若，则能确立表观遗传变化与衰老之间的因果关系。
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1. (2024高三·广东模拟) 健康的生活方式、乐观的心态和定期体检是预防癌症的主要手段。（CAR-T细胞疗法是治疗血液恶性肿瘤及淋巴瘤的研究热点，我国首款新型肿瘤治疗方法——CAR-T产品于2021年上市。左图为CAR-T细胞疗法的原理示意图，该疗法借助基因工程和细胞工程技术，根据CAR蛋白（右图）是多种肿瘤的嵌合抗原受体的特点而设计。
回答下列问题：
1. （1）机体肿瘤的发生主要与免疫系统的功能降低有关。
3. （2）图中过程①称为，这是基因工程的核心步骤，需要用到的工具酶有。过程②最常用的方法是。CAR-T细胞输入患者体内后，其活化需要两个信号的刺激，具体是。
5. （3）据图可知，CAR-T细胞疗法相对传统的药物化疗和放疗而言，具有（请写出两点）的突出优点。
7. （4） CAR-T细胞在治疗肺癌、肝癌、乳腺癌等实体瘤的总体效果上还不尽如人意，请根据右图并结合特异性免疫的原理，提出一种CAR蛋白改造的简单思路，以提升CAR-T细胞对实体瘤的疗效：。
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1. (2024高三·江门模拟) 在构建基因表达载体时，传统方法常受限于限制酶识别序列。科研人员研发了新的DNA重组方法： In-Fusion技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列），然后用In-Fusion酶处理，使同源序列形成黏性末端，最终形成的重组质粒会在受体细胞内形成完整的重组序列。主要操作过程如图示。下列叙述错误的是（）

A . 推测In-Fusion酶的作用是识别同源序列、形成黏性末端、连接磷酸二酯键 B . 载体A端和B端的序列不同，可防止目的基因与质粒反向连接及自身环化 C . 形成重组质粒时，如果温度远高于50℃，黏性末端的碱基不容易互补配对 D . 该技术无需识别特定切割位点，需识别目的基因与线性质粒任意同源序列

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1. (2024高三·江门模拟) 动物器官移植到人体内（异种移植）或是解决全球器官紧缺的办法之一。研究团队对猪肾内皮细胞进行基因编辑、改造后，得到了3种工程细胞和可提供异种移植肾源的供体猪。具体流程及部分测量数据如图示。
1. （1）研究证实供体猪的3个聚糖抗原基因（3KO）会引致人类、猴等受体的组织不相容。若以未经改造的猪肾作为异体肾源进行器官移植，受体动物的细胞和抗体都有可能对供体器官产生特异性攻击效应，导致出现现象。利用CRISPR-Cas9编辑技术敲除肾内皮细胞的3KO，该技术需人工设计一种“向导”RNA，其部分序列与3KO遵循原则结合，并引导Cas9蛋白断裂DNA双链，从而敲除3KO。
3. （2）研究表明7个人类基因（7TG）可增加不同物种之间的兼容性。获取7TG的方法有。（答出一种即可）。
5. （3）为验证敲除3KO、插入7TG对异体细胞的保护作用，研究者将三组细胞与受体猴血清共孵育，置于CO₂培养箱中培养，CO₂的主要作用是。测量裂解细胞数如图示。据此得出结论：。
7. （4）供体猪器官常携带多种病毒，其中部分病毒潜在人畜传播风险。例如已有实验证明PERV（猪内源性逆转录病毒）可以整合到体外培养的人类细胞基因组中。试分析若给人进行异种移植，PERV的基因可能通过供体猪器官整合到人类基因组的途径。因此，为确保安全，对已构建好的3KO.7TG.细胞需要进行灭活PERV处理，且在临床试行前须在动物模型中测试。
9. （5）从3KO.7TG.RI.细胞通过④过程构建供体猪所利用的现代生物学技术有。（至少答出一种）
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