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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 近年来，卒中、脑梗、心梗等心脑血管病患病率持续上升。2023年11月国家卫健委发布《心脑血管疾病防治行动实施方案》推进对患者的救治和防病工作。
1. （1）卒中、脑梗、心梗等心脑血管病多是因动脉粥样硬化、血栓引起组织缺血所致。血栓由纤维蛋白构成，组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）由527个氨基酸构成（如下图）， t-PA 进入血浆后激活纤溶酶原，使之转化成纤溶酶，酶将沉积在血管内壁的纤维蛋白分解血栓裂解，血管畅通。t-PA进入血浆后多与纤溶酶原激活剂抑制物形成复合物，很快失去活性，所以溶栓时要持续输入t-PA。然而，大剂量t-PA易诱发出血。鉴于此，有人提出通过抑制的活性，以延长t-PA的活性。进一步研究显示，t-PA第84位的半胱氨酸替换为丝氨酸后的t-PA溶血栓更快，这种改造的t-PA副作用更小。用生物化学手段直接改造“t-PA”蛋白质的结构，或是定点改造 t-PA 基因成为“突变基因”，通过基因工程等生物工程技术获取“突变的t-PA”。通过后者改造“t-PA”的主要优势是（写出一点）。
3. （2）已知t-PA基因碱基序列、丝氨酸密码子，可以通过人工合成目的基因（t-PA 突变基因）、基因与质粒重组构建表达载体、表达载体进入受体细胞等一系列操作，最终获取“突变的t-PA”。这种基于t-PA的分子结构和功能的关系，通过一系列DNA 分子层面的操作获取人类所需蛋白产品的第二代基因工程过程又叫做。
5. （3）从上述人t-PA 基因获得第84位半胱氨酸替换为丝氨酸编码序列的t-PA突变基因，常借助PCR体外定点定向诱变获得。工作原理如图：先合成包含突变碱基的两个突变引物。因突变点不位于基因端点，要借助 PCR 获得完整的t-PA 突变基因，还要合成两个正常引物1、2.参考图中正常引物1（5'-TACCAAGTGATCTGCAGA-3'）、t-PA 基因和 PCR 诱变过程原理图，正常引物2 是5’……-3’（写出5’端的6个碱基即可）
7. （4）为了与质粒高效连接，t-PA突变基因两端应携带相应的限制酶识别序列。应将限制酶识别序列设计在两条正常引物的端。限制酶能够使 DNA 分子中特定部位的键断开。
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1. (2024高三下·韶关模拟) 研究人员发现梨果实中的PbA1蛋白可催化葡萄糖异构为果糖，进而提升果实甜度。下列相关叙述正确的是（　　）

A . PbA1蛋白可为相应化学反应提供活化能 B . PbA1蛋白可催化葡萄糖和果糖生成蔗糖 C . 斐林试剂可用于验证PbA1蛋白的催化作用 D . PbA1蛋白在工业上可用于生产高果糖糖浆

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1. (2024高三·广东模拟) 利用农杆菌转化法将苏云金杆菌的Bt基因导入棉花细胞获得抗虫棉，可有效减少农药使用，提高棉花产量。下列相关叙述错误的是（　　）

A . 农杆菌转化法和肺炎链球菌转化实验的原理相同 B . 苏云金杆菌和棉花的基因都是有遗传效应的DNA片段 C . 农杆菌转化法一般需要农杆菌的Ti质粒作为表达载体 D . 由该种方法获得的转基因抗虫棉无法将抗虫基因遗传给子代

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1. (2024高三·广东模拟) 生物技术在迅猛发展，它与人类健康、生产生活的关系越来越密切。下列说法错误的是（）

A . 利用马铃薯茎尖组织培养获得的脱毒苗能提高产量 B . 单克隆抗体在疾病诊断和病原体鉴定中发挥重要作用 C . 通过乳房生物反应器可在分泌的乳汁中获得所需的药物 D . 蛋白质工程可对蛋白质结构直接改造以满足生产生活需求

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1. (2024高三·广东模拟) 健康的生活方式、乐观的心态和定期体检是预防癌症的主要手段。（CAR-T细胞疗法是治疗血液恶性肿瘤及淋巴瘤的研究热点，我国首款新型肿瘤治疗方法——CAR-T产品于2021年上市。左图为CAR-T细胞疗法的原理示意图，该疗法借助基因工程和细胞工程技术，根据CAR蛋白（右图）是多种肿瘤的嵌合抗原受体的特点而设计。
回答下列问题：
1. （1）机体肿瘤的发生主要与免疫系统的功能降低有关。
3. （2）图中过程①称为，这是基因工程的核心步骤，需要用到的工具酶有。过程②最常用的方法是。CAR-T细胞输入患者体内后，其活化需要两个信号的刺激，具体是。
5. （3）据图可知，CAR-T细胞疗法相对传统的药物化疗和放疗而言，具有（请写出两点）的突出优点。
7. （4） CAR-T细胞在治疗肺癌、肝癌、乳腺癌等实体瘤的总体效果上还不尽如人意，请根据右图并结合特异性免疫的原理，提出一种CAR蛋白改造的简单思路，以提升CAR-T细胞对实体瘤的疗效：。
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1. (2024高三下·威宁月考) 科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达，请回答：
1. （1）该研究除了证明质粒可以作为载体外，还证明了（答出一点即可）。
3. （2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的转化方法导入大肠杆菌细胞，而体外重组的噬菌体DNA通常需与组装成完整的噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、胚胎干细胞、根尖分生区细胞、酵母菌中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是。
5. （3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞里表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验室中应选用缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加的抑制剂。
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1. (2024高二下·永州开学考) 研究者从某种海洋微生物中分离了一种新的抗真菌药物，为治疗真菌感染提供新思路。下列有关药物研制或生产叙述错误的是（　　）

A . 按海水的成分和浓度添加相应的无机盐配置的培养基具有选择作用 B . 用接种环在培养基表面对样品连续划线、逐步稀释，纯化海洋微生物 C . 用固体培养基培养物微生物获得次级代谢产物，用于抗真菌活性检测 D . 获得目的微生物后，可进一步利用基因工程方法调节代谢途径提高生产量

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1. (2024高三下·湖南月考) 在未断奶的小牛胃中存在一种凝乳酶，被广泛应用于奶酪和酸奶的生产。科学家将编码牛凝乳酶的基因(长度1.5kb)导入大肠杆菌获得工程菌，再通过工业发酵批量生产凝乳酶。
1. （1）提取小牛胃黏膜组织中的mRNA，经逆转录得到cDNA，选择合适的引物进行PCR扩增，PCR引物碱基数一般在20～30个之间，过短则导致。
3. （2）如表为操作过程中可能用到的限制酶，图1为获得的目的基因及末端(除黏性末端序列外，其他碱基序列省略)，图2为要使用的质粒，其中的Tet'、Amp'分别为四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因。对质粒进行切割时，选用的两种限制酶为。目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是，导入的目的基因在变体细胞中能成功表达的理论基础是。
  限制酶 BamHⅠ BclⅠ SmaⅠ Sau3AⅠ
  识别位点及切割位点 -G↓GATCC- -T↓GATCG- -CCC↓GGG- -↓GATC-
5. （3）将转化后的大肠杆菌接种在含的培养基上进行培养，随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒，用(2)中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图，号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
  注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
7. （4）已知凝乳酶第20、24位氨基酸变成半胱氨酸，其活性可显著提高。科研人员希望运用蛋白质工程技术获得活性更强的凝乳酶，请选用合适的措施编号并排序：(用箭头表示)
  ①重组DNA分子导入大肠杆菌
  ②随机改变凝乳酶基因的序列
  ③分析突变蛋白功能，设计结构
  ④改变凝乳酶基因的特定序列
  ⑤培养细胞后提纯突变蛋白
  ⑥将改变后的凝乳酶基因与质粒重组
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1. (2024高三上·湖南期末) 为了获得抗蚜虫转基因棉花植株，研究人员分别从雪花莲和尾穗苋两种植物中提取了凝集素基因GNA和ACA，经PCR扩增(如图甲所示)，连接成GNA-ACA融合基因，再与质粒(pBI121)构建成重组载体(如图乙所示)，再经一系列操作将融合基因导入棉花细胞。回答下列问题：
1. （1）甲图中，A过程调节至95℃，目的是通过高温破坏，使双链DNA解聚为单链；B过程中需要两种引物，引物是。配制PCR反应体系时需在冰上预冷，等程序设置完毕后再放入PCR仪中，预冷的目的是。
3. （2）分析图乙可知，使用限制酶和DNA连接酶处理GNA基因和ACA基因，可获得GNA-ACA融合基因。将GNA-ACA融合基因导入质粒时应选用限制酶，目的是。
5. （3）利用含重组载体的农杆菌感染棉花细胞的方法称为。为筛选出转基因细胞，可将感染农杆菌的棉花细胞接种在含的培养基上，选取能在培养基上生长的棉花细胞，经植物组织培养可获得抗蚜虫转基因棉花植株。
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1. (2024高二下·惠州月考) 发酵工程在农业、医疗、食品等多个行业都有广泛的应用。在下列情境中仅通过发酵工程就能完成的是（）

A . 利用野生的人参细胞生产人参皂苷 B . 利用野生型赤霉菌生产赤霉素 C . 利用骨髓瘤细胞生产单克隆抗体 D . 利大肠杆菌用生产牛凝乳酶

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