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1. (2024高三·广东模拟) 生物技术在迅猛发展，它与人类健康、生产生活的关系越来越密切。下列说法错误的是（）

A . 利用马铃薯茎尖组织培养获得的脱毒苗能提高产量 B . 单克隆抗体在疾病诊断和病原体鉴定中发挥重要作用 C . 通过乳房生物反应器可在分泌的乳汁中获得所需的药物 D . 蛋白质工程可对蛋白质结构直接改造以满足生产生活需求

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1. (2024高三·广东模拟) 健康的生活方式、乐观的心态和定期体检是预防癌症的主要手段。（CAR-T细胞疗法是治疗血液恶性肿瘤及淋巴瘤的研究热点，我国首款新型肿瘤治疗方法——CAR-T产品于2021年上市。左图为CAR-T细胞疗法的原理示意图，该疗法借助基因工程和细胞工程技术，根据CAR蛋白（右图）是多种肿瘤的嵌合抗原受体的特点而设计。
回答下列问题：
1. （1）机体肿瘤的发生主要与免疫系统的功能降低有关。
3. （2）图中过程①称为，这是基因工程的核心步骤，需要用到的工具酶有。过程②最常用的方法是。CAR-T细胞输入患者体内后，其活化需要两个信号的刺激，具体是。
5. （3）据图可知，CAR-T细胞疗法相对传统的药物化疗和放疗而言，具有（请写出两点）的突出优点。
7. （4） CAR-T细胞在治疗肺癌、肝癌、乳腺癌等实体瘤的总体效果上还不尽如人意，请根据右图并结合特异性免疫的原理，提出一种CAR蛋白改造的简单思路，以提升CAR-T细胞对实体瘤的疗效：。
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1. (2024高三下·威宁月考) 科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达，请回答：
1. （1）该研究除了证明质粒可以作为载体外，还证明了（答出一点即可）。
3. （2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的转化方法导入大肠杆菌细胞，而体外重组的噬菌体DNA通常需与组装成完整的噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、胚胎干细胞、根尖分生区细胞、酵母菌中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是。
5. （3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞里表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验室中应选用缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加的抑制剂。
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1. (2024高二下·永州开学考) 研究者从某种海洋微生物中分离了一种新的抗真菌药物，为治疗真菌感染提供新思路。下列有关药物研制或生产叙述错误的是（　　）

A . 按海水的成分和浓度添加相应的无机盐配置的培养基具有选择作用 B . 用接种环在培养基表面对样品连续划线、逐步稀释，纯化海洋微生物 C . 用固体培养基培养物微生物获得次级代谢产物，用于抗真菌活性检测 D . 获得目的微生物后，可进一步利用基因工程方法调节代谢途径提高生产量

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1. (2024高三下·湖南月考) 在未断奶的小牛胃中存在一种凝乳酶，被广泛应用于奶酪和酸奶的生产。科学家将编码牛凝乳酶的基因(长度1.5kb)导入大肠杆菌获得工程菌，再通过工业发酵批量生产凝乳酶。
1. （1）提取小牛胃黏膜组织中的mRNA，经逆转录得到cDNA，选择合适的引物进行PCR扩增，PCR引物碱基数一般在20～30个之间，过短则导致。
3. （2）如表为操作过程中可能用到的限制酶，图1为获得的目的基因及末端(除黏性末端序列外，其他碱基序列省略)，图2为要使用的质粒，其中的Tet'、Amp'分别为四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因。对质粒进行切割时，选用的两种限制酶为。目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是，导入的目的基因在变体细胞中能成功表达的理论基础是。
  限制酶 BamHⅠ BclⅠ SmaⅠ Sau3AⅠ
  识别位点及切割位点 -G↓GATCC- -T↓GATCG- -CCC↓GGG- -↓GATC-
5. （3）将转化后的大肠杆菌接种在含的培养基上进行培养，随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、4)培养并提取质粒，用(2)中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图，号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
  注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中
7. （4）已知凝乳酶第20、24位氨基酸变成半胱氨酸，其活性可显著提高。科研人员希望运用蛋白质工程技术获得活性更强的凝乳酶，请选用合适的措施编号并排序：(用箭头表示)
  ①重组DNA分子导入大肠杆菌
  ②随机改变凝乳酶基因的序列
  ③分析突变蛋白功能，设计结构
  ④改变凝乳酶基因的特定序列
  ⑤培养细胞后提纯突变蛋白
  ⑥将改变后的凝乳酶基因与质粒重组
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1. (2024高三上·湖南期末) 为了获得抗蚜虫转基因棉花植株，研究人员分别从雪花莲和尾穗苋两种植物中提取了凝集素基因GNA和ACA，经PCR扩增(如图甲所示)，连接成GNA-ACA融合基因，再与质粒(pBI121)构建成重组载体(如图乙所示)，再经一系列操作将融合基因导入棉花细胞。回答下列问题：
1. （1）甲图中，A过程调节至95℃，目的是通过高温破坏，使双链DNA解聚为单链；B过程中需要两种引物，引物是。配制PCR反应体系时需在冰上预冷，等程序设置完毕后再放入PCR仪中，预冷的目的是。
3. （2）分析图乙可知，使用限制酶和DNA连接酶处理GNA基因和ACA基因，可获得GNA-ACA融合基因。将GNA-ACA融合基因导入质粒时应选用限制酶，目的是。
5. （3）利用含重组载体的农杆菌感染棉花细胞的方法称为。为筛选出转基因细胞，可将感染农杆菌的棉花细胞接种在含的培养基上，选取能在培养基上生长的棉花细胞，经植物组织培养可获得抗蚜虫转基因棉花植株。
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1. (2024高二下·惠州月考) 发酵工程在农业、医疗、食品等多个行业都有广泛的应用。在下列情境中仅通过发酵工程就能完成的是（）

A . 利用野生的人参细胞生产人参皂苷 B . 利用野生型赤霉菌生产赤霉素 C . 利用骨髓瘤细胞生产单克隆抗体 D . 利大肠杆菌用生产牛凝乳酶

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1. (2024高三下·武汉开学考) 据下图分析，下列有关基因工程的说法不正确的是（）

A . 为防止目的基因与质粒任意结合而影响基因的表达，应用限制酶Ⅰ、Ⅱ同时切割二者 B . 限制酶、DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键 C . 与启动子结合的是RNA聚合酶 D . 能够检测到标记基因表达产物的受体细胞中，也一定会有目的基因的表达产物

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1. (2024高三下·茂名月考) 为构建肝特异性CD36 基因敲除小鼠模型，研究人员利用Cre-loxP 系统开展实验。该系统中的Cre可识别DNA 分子中特定的loxP序列，当DNA 分子上存在两个同向loxP序列时，Cre可将两个loxP序列之间的 DNA序列剪除，切口连接形成的环化产物被降解，从而达到敲除特定基因的目的(如图1)。图2中的 A 鼠成对的 CD36 基因两侧均分别引入一个同向 loxP 序列(基因型表示为L⁺L⁺ $\text{[math]}$ 野生型为 L^-L^-) $\text{[math]}$ B鼠中含一个外源导入的Cre编码序列(基因型表示为(C⁺C⁺ $\text{[math]}$ 野生型为C^-C^-) $\text{[math]}$ ， Alb表示肝脏组织特异性启动子。研究人员利用 A、B两类工具鼠作为亲本，选用合适的杂交策略，即可获得基于Cre-loxP系统的肝特异性CD36 基因敲除目标小鼠。
回答下列问题：
1. （1）图 2 中 A 鼠的基因型可表示为L⁺L⁺ C^-C^- 。目标小鼠的基因型表示为。A鼠与B鼠杂交获得的子一代的基因型及比例为。欲获得目标鼠，应继续进行的实验操作是。
3. （2）启动子的作用是。图1中 Cre能将双链DNA 在特定部位切割开，其作用类似于基因操作工具中的。研究人员取鼠尾细胞通过(法)鉴定子代1~8号小鼠的基因型，结果如图3(已知 A 鼠、B鼠的基因型检测结果分别与图3 中子代6号、1号小鼠相同)，代表目标小鼠的是号，判断依据是。
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1. (2024高三下·长沙月考) 胰岛素对治疗糖尿病有积极的作用，为了批量生产人胰岛素，科学家提出了两种通过基因工程改造大肠杆菌来生产人胰岛素的方法。
方法1：根据胰岛素A、B两条肽链人工合成两种DNA片段，利用大肠杆菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素。
方法2：利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，导入大肠杆菌获得胰岛素。这两种方法使用同一种质粒作为载体。下图为过程中使用的质粒及目的基因的部分结构，请回答下列问题。
1. （1）该项技术操作时不选用EcoRⅠ切割质粒的原因是。
3. （2）将人的胰岛素基因导入大肠杆菌，需要先构建由启动子、目的基因、标记基因、终止子等组成的重组质粒，该过程为基因工程的核心，称为，其中启动子的作用是。以上（填“方法1”“方法2”或“方法1和方法2”）获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
5. （3）若胰岛素基因的编码链（与模板链互补的链）首端到末端的序列为5^'—ATCTACGCGCTCATCCG…（省略3n个核苷酸序列）…CGCAGCAATGAGTAGCG—3^'。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶的识别序列。某同学设计如下四种PCR引物，其中适合选用的一对引物是。
  A.5^'—CTCGAGGGAAAGTCGAGT—3^' B.5'—CTCGAGATCTACGCGCTC—3^'
  C.5^'—CAATTGCGCTACTCATTG—3^' D.5'—CAATTGCCTTTCAGCTCA—3^'
7. （4） β-半乳糖苷酶可以分解无色的）X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。大肠杆菌经处理后，与重组质粒混合培养一段时间，再接种到添加了的培养基上，筛选出的菌落即为工程菌种。
9. （5）科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。获得赖脯胰岛素基因的途径是：从预期的蛋白质功能出发→→→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因。
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限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
识别位点及切割位点	-G↓GATCC-	-T↓GATCG-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-