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1. (2024高二下·衡水期中) 下列有关DNA粗提取与鉴定实验的叙述错误的是（）

A . 可用新鲜猪血代替鸡血做实验材料 B . 所得到的含DNA的黏稠物应加入到0.14mol/L的NaCl溶液中继续提纯 C . 提取含DNA的滤液可用菠菜加入一定量的洗涤剂和食盐进行研磨 D . 在含DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，一段时间后溶液会变蓝

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1. (2024高三下·湛江模拟) 研究发现，若将第52位的脯氨酸（密码子为 CCA）替换成苏氨酸（密码子为 ACA），则可增强抗菌肽的抑菌性。抗菌肽基因的部分碱基序列及可供选择的引物如图1所示，箭头下方的数字代表碱基序号。现利用重叠延伸 PCR 技术对抗菌肽基因进行改造以获得抑菌性更强的抗菌肽，过程如图2所示，其中Ⅰ为转录模板链，引物上的“·”代表突变位点。改造过程中 PCR2所使用的引物组合为（）

A . 引物1和引物4 B . 引物2和引物6 C . 引物2和引物4 D . 引物3和引物5

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1. (2024高三下·湛江模拟) 研究低温条件下番茄细胞WHYI 基因对光合作用的影响，对于温度敏感型蔬菜作物的栽培具有重要的实践意义。回答下列问题：
1. （1）研究人员利用重组DNA 技术，将克隆的WHYI 基因与外源高效启动子连接，导入番茄基因组中构建WHYI 基因的过表达植株（W⁺），如图1所示。启动子是识别、结合酶的部位。若限制酶切割WHYI 基因和番茄基因组后形成相同的黏性末端（即图中Ⅰ、Ⅱ处），则会出现（答出2点）等情况，从而导致构建过表达植株的成功率下降。
3. （2） PCR 的产物一般通过电泳来鉴定，结果如图2所示。1号泳道为标准，2号泳道为阳性对照（提纯的相关蛋白基因片段），3号泳道为实验组。1 号泳道的条带实质为_，若3号泳道有杂带（非目的 DNA 片段）出现，则原因可能是（答出2 点）。
5. （3）小干扰 RNA（siRNA）能诱导特定基因转录出的 mRNA降解，导致基因沉默。研究人员据此构建了 WHYI 基因的沉默植株（W^-），siRNA 因阻图2断了过程而关闭了WHYI 基因。进一步研究发现，番茄细胞WHYI 基因影响光反应阶段 D1 蛋白（可捕捉光能）的含量，且与温度有关。研究人员用特定抗体检测D1蛋白在叶绿体内的含量，结果如表所示。该实验中的自变量为，对比三种番茄的D1蛋白含量可得到的结论是。
  温度
  25 ℃
  4℃
  植株类型
  W⁺
  W
  W^-
  W⁺
  W
  W^-
  D1 蛋白含量
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1. (2024高三下·贵阳模拟) CRM1 是一种核转运蛋白，由 CRMI 基因控制产生，转运含有 NES序列的货物蛋白。科学研究发现，肿瘤细胞中CRMI 基因过度表达，含有 NES序列的肿瘤抑制因子被过量地转运至细胞质，使得它们无法在细胞核内发挥正常功能，会促进肿瘤的发生及生长。为探究CRM1的运输机制及肿瘤的治疗，科学家进行了相关研究。请回答下列问题：
1. （1）研究人员利用 PCR 技术大量扩增CRMI 基因，需要根据设计两种引物，引物的作用是。
3. （2） CRM1 C528S 是 CRM1 突变体，不具有运输能力，GST-NES 为某种肿瘤抑制因子，CRM1蛋白可能与货物蛋白的转运有关，研究人员利用上述物质设计实验进行跨膜模拟，结果发现只有③组实现了对 GST-NES 的跨膜转运，据此可推断。
  
  ①
  ②
  ③
  ④
  GST-NES
  +
  +
  +
  +
  CRM1
  -
  +
  +
  -
  RanGTP
  -
  -
  +
  +
  CRM1 C528S
  -
  -
  -
  +
  注：“+”表示有；“-”表示无。
5. （3）科学家利用计算机成功筛选出了与货物蛋白结构相似的小分子 KPT，并将其制备成抑制肿瘤细胞药物，推测KPT的作用机理是。
  请设计实验验证上述推论，写出实验思路和预期结果。（材料：肿瘤小鼠模型若干只、正常小鼠模型若干只、小分子 KPT。注：药物处理方法与肿瘤的具体检测方法不做要求）
  实验思路：。
  预期结果：。
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1. (2024高三下·楚雄模拟) 二十碳五烯酸（EPA）能促进体内饱和脂肪酸代谢，具有降低血液黏稠度、预防心脑血管疾病的功效。研究人员利用转基因技术从海洋生物中提取了EPA合成途径的关键基因pfaB，并将其导入酵母菌内，通过酵母菌发酵生产EPA。图1和图2分别是转基因过程中使用的含目的基因的DNA片段和质粒。回答下列问题：
1. （1）为确保目的基因导入酵母菌后能稳定复制和表达，需要在图2质粒中加入（答出三点）等结构才行。若要将pfaB基因导入植物细胞，可采用（填一种）法。
3. （2）据图可知，为了使目的基因和质粒定向连接，构建重组质粒时应选择限制酶对基因pfaB和质粒进行切割。用PCR技术对基因pfaB进行扩增时，要向仪器中加入足量的引物（填图1中数字），以保证扩增的正常进行。PCR缓冲液中要添加适量的Mg²⁺ ，其目的是。PCR结束后可采用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定，一定pH下，在电场中，DNA分子会向着的电极移动，DNA分子在凝胶中的迁移速率与（填两种）等因素有关。
5. （3）有人认为将基因pfaB导入大肠杆菌细胞中，无法得到具有相应生理功能的表达产物，其理由是。
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1. (2024高三下·云南模拟) 鸭坦布苏病毒感染鸭、鹅等多种禽类，给禽类养殖业带来严重危害。科研人员通过基因工程获取该病毒的prM蛋白用于制备单克隆抗体。为了鉴定单克隆抗体识别prM蛋白的具体区域，将prM蛋白逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如下图（“aa”表示氨基酸，“＋”表示有反应，“－”表示无反应）。
回答下列问题。
1. （1）通过基因工程获取prM蛋白，需要利用技术快速扩增目的基因，与生物体内DNA复制相比，该技术所需酶的特殊性在于，反应过程中复性的结果是。
3. （2）用prM蛋白为抗原制备单克隆抗体，需用纯化的prM蛋白对小鼠进行免疫，其目的是获得细胞，并将该细胞与骨髓瘤细胞融合，对经选择培养的杂交瘤细胞进行培养和，多次筛选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再将其注射到小鼠的腹腔内增殖、合成抗体。
5. （3）根据图示实验结果分析，该单克隆抗体识别prM蛋白的区域大概为（填“40~50”“40~55”或“40~60”）位氨基酸。
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1. (2024高二下·仁寿期中) THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述正确的是（）
EcoRⅠ
BamHⅠ
KpnⅠ
MfeⅠ
HindⅢ

A . 若采用PCR技术对一个THP9基因进行扩增，则第n代复制共需要引物2ⁿ-1个 B . 构建基因表达载体时，用MfeⅠ、HindⅢ切割质粒，用EcoRⅠ、HindⅢ切割目的基因 C . 利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物1和引物4 D . PCR过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg²⁺用于激活RNA聚合酶

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1. (2024高二下·仁寿期中) 在利用洋葱进行“DNA的粗提取和鉴定”的实验中，相关操作正确的是（）

A . 研磨洋葱时，加入适量的研磨液瓦解细胞膜，充分释放核DNA B . 利用定性滤纸进行过滤，以去除杂质，提高DNA的含量和纯度 C . 向DNA滤液中加入等体积、预冷的50%酒精，以获得DNA粗提物 D . 将白色丝状物加入4mL二苯胺试剂中沸水浴，以利于发生颜色反应

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1. (2024高三下·河池模拟) 目的基因和载体如果用同一种限制酶处理，连接时会出现正反接的情况，为鉴定筛选出的表达载体中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR后，结合电泳技术鉴定，图示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，其中目的基因为长度300bp的片段。下列有关说法不正确的是（　　）

A . PCR退火温度不宜太低，避免引物错配和模板链形成双链 B . 电泳条带迁移的位置和速度与DNA分子的大小、带电量和构象有关 C . 选取引物甲丙，扩增出450bp长度片段时，可以说明目的基因正接 D . 选取引物甲乙，扩增出400bp长度片段时，可以说明目的基因反接

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1. (2024高三下·广西壮族自治区模拟) 新冠疫苗能有效预防新冠肺炎。目前中国已经上市的疫苗中有重组蛋白疫苗和重组腺病毒载体疫苗等。科研人员选择了SARS-CoV-2的S蛋白基因通过转基因技术制备了重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗（如图所示）。回答下列问题：
1. （1）据图1可得到含有多个限制酶切位点的S蛋白基因序列，若要在短时间内获得大量的S蛋白基因，可采取的方法是，该方法的实质是进行。该过程需要人工合成部分核苷酸片段，合成的该片段具有的特点是（答两点）。
3. （2）获得足够量的S蛋白基因后须构建基因表达载体，其目的是。如图2是相关的质粒，要保证S蛋白基因的正确表达，需选用和HindⅢ酶进行切割，且不破坏标记基因。
5. （3）重组腺病毒载体疫苗是把腺病毒中原有与复制相关的基因剔除，替换为新冠病毒S蛋白的基因。与重组蛋白疫苗相比，重组腺病毒载体疫苗对新冠肺炎的预防效果更好，从免疫的角度分析，原因是。
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