1.  瘦素是一种由脂肪组织合成和分泌的肽类激素。P载体含有的绿色荧光蛋白（GFP）基因能在真核细胞中表达GFP。将目的基因插入GFP基因后，能表达出目的蛋白和GFP的融合蛋白，根据荧光的强弱，可确定目的基因在细胞内的表达情况。为研究瘦素的功能，科学家构建了瘦素基因真核表达载体，检测瘦素基因在小鼠成纤维细胞中的表达情况。瘦素基因及P载体的结构如图所示。

回答下列问题。

1. （1） PCR扩增瘦素基因时，与引物1互补的a链左侧是脱氧核苷酸链的（填“5^'”或“3^'”）端。据图推测，构建该基因表达载体时，P载体上应有启动子、终止子、标记基因、复制原点、。
3. （2） 已知HindⅢ和BamHⅠ在P载体上的切割位点非常接近。为确定重组质粒是否构建成功，用HindⅢ、BamHI分别对瘦素基因PCR产物、P载体和重组质粒双酶切，再进行电泳，结果如图所示。若重组质粒构建成功，请在图中将酶切结果对应位置的条带涂黑。

   

5. （3） Kan^r/Neo^r是一种抗性基因，在真核细胞中表达具有新霉素抗性，而在原核细胞中表达具有卡那霉素抗性。同种基因在真核、原核细胞中表达结果不同，可能的原因是。本实验中为筛选转化的细胞，应在培养基中添加。
7. （4） 为检测瘦素基因是否成功表达，可用的鉴定方法是（答出2种）。为进一步获得更多能表达融合蛋白的细胞，还需要进行。