1. 异丁醇是一种新型能源。科研人员研究了酿酒酵母的异丁醇合成途径（如图9），尝试对其进行改造，以期实现大规模生产（如图10）。其中，质粒pUC18可实现目的基因在真核、原核细胞中过表达。

注：Amp^r为氨苄青霉素抗性基因，氨苄青霉素可抑制细菌细胞壁的形成，对真核生物生长无影响

his为组氨酸合成酶基因，组氨酸是微生物生长所必需

限制性内切核酸酶识别序列及切割位点：

BamHI：5’-G↓GATCC-3’ XhoI：5’-C↓TCGAG-3’ Sau3AI：5’-↓GATC-3’ SacI：5’-GAGCT↓C-3’

1. （1） 为实现异丁醇大规模生产，可选取的目的基因是（     ）。（多选）

   A . 酶A基因 B . 酶B抑制基因 C . 酶E基因 D . 酶F抑制基因
3. （2） 若选用XhoI和Sau3AI对质粒pUC18进行切割，为实现其与目的基因的连接，可在目的基因两端添加。（编号选填）

   ①XhoI和Sau3AI的识别序列 ②XhoI和BamHI的识别序列

   ③SacI和Sau3AI的识别序列 ④SacI和BamHI的识别序列

5. （3） 下列关于培养基I~ III的叙述正确的是（     ）。（单选）

   A . 培养基I是鉴别培养基 B . 培养基II可形成单个菌落 C . 培养基I和II的营养成分相同 D . 培养基I和III的营养成分相同
7. （4） 启动子的表达具有物种特异性，为了大量获得重组质粒并高效筛选异丁醇生产菌种，图10中的大肠杆菌和酿酒酵母需具备的特点是（    ）。（多选）。

   A . 氨苄青霉素抗性大肠杆菌 B . 氨苄青霉素敏感大肠杆菌 C . 组氨酸合成正常酿酒酵母 D . 组氨酸合成缺陷酿酒酵母
9. （5） 线性化后的重组质粒可随机整合到酿酒酵母的染色体DNA中并稳定表达。经上述流程获得的异丁醇生产菌种在适宜条件下培养，异丁醇产量较野生型酿酒酵母减少，试分析此类菌种异丁醇产量减少的原因。。
11. （6） 为初步筛选异丁醇高产菌种，科研人员构建了相关载体，并导入异丁醇生产菌种，载体的部分序列及筛选原理如图11。
    
                                      图11
    已知BmoR基因的编码链序列为5’-GTGTTAATAT······GATTCATGAA-3’，若将其编码的亮氨酸替换为天冬氨酸，可提高BmoR蛋白与异丁醇的结合能力。现利用PCR技术定点突变改造BmoR蛋白，需设计的引物的序列是。（编号选填）（密码子：亮氨酸5’-UUA-3’，天冬氨酸5’-GAC-3’）

    ①5’- ATATGTCCAC -3’ ②5’-GTGGACATAT -3’

    ③5’- GATTCATGAA -3’ ④5’-TTCATGAATC -3’ 

13. （7） 结合图11及所学知识，分析利用上述载体筛选异丁醇高产菌种的原理。

15. （8） 发酵罐是发酵工程中常用的生物反应器，其主要作用是（ ）。（单选）

    A . 隔绝外界空气 B . 模拟微生物细胞代谢所需环境 C . 杀灭微生物的芽孢 D . 提供液体环境便于收集发酵液