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基因工程的操作程序(详细)
1. 基因X表达的蛋白质是重要的药物,构建转基因X的大肠杆菌可用于生产药物蛋白,选用的质粒和基因X的结构如图所示。已知lacZ基因编码的β-半乳糖苷酶能分解白色的X-gal,产生蓝色物质,构建重组质粒时要将基因X插入lacZ基因的内部。回答下列问题:
(1) 分析上图可知,质粒的
序列可与
酶结合后驱动基因转录。lacZ基因上有多个限制酶识别序列及切割位点,其优点是
。
(2) 构建重组质粒时,为提高效率和防止目的基因自身环化,需要扩增基因X一侧限制酶
识别的序列,另一侧用限制酶
进行切割。
(3) 利用图中质粒的两种标记基因筛选含重组质粒的工程菌时,需要在培养基中添加一定量的
,培养后挑选白色的菌落用于生产。挑选白色菌落的原因是
。