1. 图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tet^r)和氨苄青霉素抗性基因（amp^r）。请回答下列问题：

1. （1） EcoR V酶切位点为 ，EcoR V酶切出来的线性载体P1为末端。
3. （2） 用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在酶作用下，形成重组质粒P3。
5. （3） 为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“﹣”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是、。

   菌落类型平板类型	A	B	C
   无抗生素	﹢	﹢	﹢
   氨苄青霉素	﹢	﹢	﹣
   四环素	﹢	﹣	﹣
   氨苄青霉素+四环素	﹢	﹣	﹣

7. （4） 为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400 bp片段，原因是。